TRADUÇÃO

SÍNTESE PROTEICA
Fluxo da Informação
Genética

Código genético

3 bases nitrogenadas

1 amino ácido
 Marcos no metabolismo de
proteínas
• 1. ~1950- síntese proteica em pequenas
partículas de ribonucleoproteínas (Paul
Zamecnik- fracionamento celular,
radioativo)- ribossomos
• 2. aminoacil-tRNA sintetases- tRNA,
ATP Hoagland & Zamecnick)
• 3. hipótese do adaptador (tRNA, anti-
codon Francis Crick)
 Síntese proteica
• ~300 moléculas envolvidas
• ~90% da energia gasta nos processos
biossintéticos
• Bactérias: ~35% do peso: 20.000
ribossomos, 100.000 proteinas (fatores e
enzimas), 200.000 tRNAs
• Processo rápido: ~20 resíduos/seg
• Erro: 1 a cada 10.000 aa adicionados
 Síntese e Processamento de Proteínas

Transcrição Processamento
pós-traducional
Transcrito primário

Processamento
pós-transcricional
mRNA maduro
Modificações
covalentes nos
Tradução
aminoácidos
Dobramento

Proteína
(inativa)

Proteína ativa
Código genético
(degenerado)
Outras seqüências de mRNA podem especificar a
mesma seqüência de aminoácidos
Código genético alternativo em mitocôndrias
 Troca de “frame”
Virus (sarcoma de Rous): gag e pol (1/20)
• Gag: ... ACA AAU UUA UAG GGA GGG
• Pol: .... ACA AAU UUAUA GGG AGG
 Código genético
• Códon de iniciação- AUG (raro- GUG,
UUG)

• Códon de terminação- UAA, UAG, UGA

 RNAs
Tipo Tamanho Função
tRNA Pequeno Transporte de aa para o local de síntese
rRNA Diversos Forma os ribossomos, juntamente com proteínas
mRNA Diversos Determina a sequência de aa na prteína
snRNA Pequeno Processa o mRNA inicial nos eucariotos
miRNA Pequeno Afeta a expressão gênica (crescimento,
desenvolvimento)
siRNA pequeno Afeta a expressão gênica. Cientistas utilizam para
bloquear a expressão do gene de interesse
tRNA
O ribossomo acomoda
dois tRNAs carregados
Etapas da síntese de proteínas

1. Ativação do aminoácido
2. Iniciação
3. Elongação
4. Terminação
5. Dobramento/processamento pós-tradução
1. Ativação do aminoácido

Aminoacil tRNA sintetase

ATP + aa aminoacil-AMP + Ppi

aminoacil-AMP + tRNA aminoacil-tRNA +

Aminoacil tRNA sintetase
AMP
1. Ativação do aminoácido

Aminoacil tRNA sintetase

aminoacil-AMP
Classe I Classe II

aminoacil-AMP

aminoacil-tRNA
1. Ativação do aminoácido

Ligação do aminoácido ao
tRNA

Aminoacil t-RNA

A etapa de ativação do
aminoácido é determinante
na fidelidade da tradução
2. Iniciação (bactéria)

Ribossomo bacteriano reconhece

uma sequência no mRNA-

Shine Delgarno
 Nas bactérias, o fMet-tRNAf tem características
que o distinguem como tRNA
primeiro amino iniciador (tRNAi)
ácido é formil-
metionina

Só tRNAi liga no sítio P e ao fator de iniciação (IF1 ou IF2)

Eucariotos- primeiro aa é metionina
 Adição do grupo formil
no metionil-tRNAf:
dependente de ácido
fólico

tRNA para formil-metionina

é diferente da tRNA para metionina

H
3. Elongação

AA2
Peptidil-transferase- 23S?
Sítio E- bactéria
Translocação
 4. Terminação

Proteínas de terminação (RFs):

diferentes de acordo com o
códon de terminação (bactérias)

RFs- estrutura semelhante aos

tRNAs, mas ligam em regiões
distintas nos ribossomos

Túnel de saída do ribossomo

para a proteína- 12- 20 Å
Polissomo :10-100
ribossomos
Fatores proteicos necessários para iniciação da tradução

Bactéria:
IF-1 – Previne ligação prematura dos tRNAs ao sítio A
IF-2 – Facilita ligação do fMet-tRNAf a subunidade 30S (liga GTP)
IF-3 – Liga suunidade 30S e previne associação prematura da
subunidade 50S. Aumenta especificidade do sítio P pelo fMet-tRNAf

Eucariotos:
eIF1- Liga mRNA
eIF2 –Facilita ligação do Met-tRNAi a subunidade 40S (liga GTP)
eIF2B, eIF3 – Ligam subunidade 40S/ mRNA
eIF4A – Helicase de RNA para remover estrutura secundária do mRNA
eIF4B – Liga mRNA, facilita varredura para localizar o primeiro AUG
eIF4E – Liga 5´cap do mRNA
eIF4G – Liga e IF4E e protéina que liga cauda poliA (PAB)
eIF5 – Promove dissociação de outros fatores para facilitar associação de 60S
eIF6 – Facilita dissociação de 80S inativo em 40S e 60S
 Processamento após (ou
durante) a síntese de proteínas

Dobramento (Folding)
Clivagem proteolítica (incluindo amino-
terminal)
Modificações covalentes nos aminoácidos
Degradação

• Influencia a estrutura e função de

proteínas
 20 aminoácidos
diferentes
Modificações covalentes
nos aminoácidos
(modificações pós-
traducionais):
Ex:
Metilação
Acetilação
Hidroxilação
Glicosilação
Fosforilação
Grupos prostéticos ~200 aminoácidos
Acilação diferentes
(modificados covalentemente)
 Fosforilação
Modulação da atividade de proteínas, modulação de interações
moleculares, sinalização celular

Fosfo-serina

Fosfo-histidina

Fosfo-tirosina Fosfo-treonina
Glicosilação

Os carboidratos são
ligados aos resíduos
de aminoácidos
através de ligações
N- ou O- glicosídicas
Endereçamento de proteínas
Peptídeo sinal direciona proteínas secretadas e/ou
glicosiladas para o retículo endoplasmático (ER)
Síntese de proteínas acoplada ao ER
Glicosilação

Os carboidratos são
ligados aos resíduos
de aminoácidos
através de ligações
N- ou O- glicosídicas
Puromicina: estrutura
similar a extremidade 3’
do aminoacil-tRNA,
ocorrendo a formação de
peptidil-puromicina e
interrupção da síntese
proteica
Inibição da síntese proteica por antibióticos e toxinas

Estreptomicina
Causa leitura incorreta dos
códons e inibe iniciação
Tetraciclina
Bloqueia o sítio A do
ribossomo bacteriano e
inibe associação do
aminoacil-tRNA
Inibição da síntese proteica por antibióticos e toxinas

Cloranfenicol
Bloqueia atividade de
peptidil transferase de
ribossomos bacterianos e
mitocondriais

Cicloheximida
Bloqueia atividade de
peptidil transferase do
ribossomo eucariótico
Inibição da síntese proteica por antibióticos e toxinas

Toxinas proteicas que inibem a tradução:

Toxina da difteria: inativa o fator eEF2 (ADP-ribosila

histidina)

Ricina : inativa a subunidade 60S (depurina uma

adenosina do rRNA 23S)
 Ribossomos
Nucleoide (DNA compactado)
Pili

Flagelo

Envelope celular
(membrana)
 Ribossomos Informação
genética- DNA nuclear
nos eucariotos

Núcleo

Envelope nuclear Ribossomos

Mitocondrias

Cloroplasto
A T

G C
T A

C A
Estrutura do
DNA
DNA fita dupla: cadeias antiparalelas
 Decifrando o Código Genético
1.Quantos nucleotídeos seriam necessários?

4 nucleotídeos 20 aminoácidos
diferentes no diferentes na
DNA proteína

Código de um nucleotídeo = 4 combinações

Código de dois nucleotídeos (42) = 16 combinações
Código de três nucleotídeos (43) = 64 combinações
 Decifrando o Código Genético
2.O código não é superposto

aa1 aa2

ABCDCD
aa1
aa2
aa3
aa4
Análise da seqüência de aminoácidos de mutantes da proteína da
capa do vírus mosaico do tabaco mostraram que o código não era
superposto. A mutação em um nucleotídeo leva a mudança de um
aminoácido e não de três aminoácidos
 Decifrando o Código Genético

3.O código não tem pausas

Fase de leitura 1

Fase de leitura 2

Fase de leitura 3 5’ A U G C A C U U U A C U A A

O código é lido sequencialmente sem pausas a partir do início

determinado (3 fases de leitura são possíveis).
 Decifrando o Código Genético
4. O código é degenerado

64 códons para codificar 20 aminoácidos???

61 códons codificam 20 aminoácidos. Para a maioria

dos aminoácidos há mais de um códon
3 códons não codificam aminoácidos. São códons de
terminação da síntese de proteínas
 Decifrando o Código Genético
5. Como o código foi decifrado?

Tanto as sequências de bases do DNA com a de

aminoácidos das proteínas eram desconhecidas!!!

Nirenberg em 1961 mostrou que a adição de o RNA

sintético poliuridilato (poli U) em um sistema de síntese
proteíca livre de células (extrato de E.coli) levava a
síntese de polifenilalanina:

UUU = Phe
Poli U foi sintetizado in vitro pela polinucleotídeo
fosforilase...
 Ribossomo

Direção da Transcrição

Tradução
- Síntese das proteínas
Direção da Tradução da célula
- Ocorre nos ribossomos

Nas bactérias, transcrição e tradução estão acopladas....