IMUNOFLUORESCÊNCIA

INTEGRANTES

 Eduardo Vertuani;
 Gil Mello Evaristo;
 Marcelo Vieira;
 Jhonny;
 Iara Silveira Mazega;
DEFINIÇÃO

O exame da Imunofluorescência é uma técnica que

permite a localização de antígenos em tecidos ou células
a partir de uma marcação com anticorpos conjugados a
uma molécula fluorescente.
PRINCÍPIO DA TÉCNICA

 Anticorpos ou antígenos são conjugados (ligados de modo

covalente) a uma substância (fluorocromo), que, quando
expostas a radiações UV, emite luz no espectro visível.
 Assim, como a ligação Ag-Ac é específica, um anticorpo
conjugado pode ser usado para detectar um determinado
antígeno e vice-versa.
 A reação é feita em lâminas de microscopia (um pouco
mais finas que as comuns) e a observação tem lugar num
microcópio com luz UV (microscópio de fluorescência).
PRINCIPIO DA TÉCNICA
FLUOROCROMO

 São corantes que absorvem a luz UV e emitem luz visível.

 Fazem ligações covalentes emitindo coloração diferente da de
tecidos, funcionando como marcadores.
 São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios,
sendo os mais comuns:
• Fluresceína (FITC)
• Rodamina (TRICT)
TIPOS DE REAÇÃO
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)

 Conhecida também como técnica de camada simples

 Utilizada para detecção de Antígenos em amostras
clínicas, com Anticorpos marcados com fluorocromos.
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)

 As etapas compreendem:
• Fixação do esfregaço da lâmina;
• Tratamento com anticorpo marcado;
• Incubação;
• Lavagem para remover excesso de anticorpos marcados não
ligados;
• Visualização no microscópio fluorescente
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)

Vantagens:
 Alta especificidade e sensibilidade.
 Possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua
localização.
Desvantagens:
 Alto custo do microscópio de fluorescência.
 Necessidade de um conjugado para cada antígeno que se deseja
identificar ou localizar.
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)

 Também conhecida como técnica de dupla camada

 PARA PESQUISA DE ANTÍGENOS
• Incuba-se a célula ou o tecido com o anticorpo específico,
formando um imunocomplexo.

• Realiza-se lavagem para retirar os anticorpos não ligados.

• A preparação é incubada com conjugado, marcado com

fluorocromo.

• O preparado é observado em microscópio de fluorescência.

IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)

 PARA PESQUISA DE ANTICORPOS

• Antígenos padronizados são fixados à lâmina

• O soro do paciente é diluído, colocado sobre o antígeno e incubado

para a formação do complexo Ag-Ac.

• Realiza-se a lavagem para retirada de anticorpos não ligados.

• A preparação é incubada com o conjugado fluorescente, se houver

anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo específico para
o antígeno.

 O preparado é observado em microscópio de fluorescência

IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)

VANTAGENS:
 Sensibilidade, Especificidade, Reprodutibilidade, Simples
padronização e execução,o mesmo conjugado pode ser
usado em sistemas diferentes, Para determinar as classes e
subclasses de anticorpos são utilizados conjugados
específicos
DESVANTAGENS:
 Necessidade de microscópio de fluorescência.
 Subjetividade na leitura.
 Não-automação.
 APLICAÇÕES

Imunofluorescência Direta
 Detecção direta de microrganismos em secreções, urina, fezes, em corte de
tecidos etc.Também é utilizada na fenotipagem de células tumorais.

Imunofluorescência Indireta
Medicina humana
 Diagnóstico sorológico de várias doenças infecciosas como a Doença de
Chagas, a SIDA/AIDS, as hepatites e complexos em doenças auto-imunes.
Medicina Veterinária
 Toxoplasmose, Neosporose, Raiva, Campilobacteriose Genital Bovina.
 IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA

reação positiva de imunofluorescência indireta para a detecção de

anticorpos contra promastigotas de Leishmania.
IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA

Giadia lamblia
 IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA

Detecção de Clostridium
septicum pela técnica de
imunofluorescência direta
 IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA

Reação de imunofluorescência indireta positiva mostrando

formaspromastigotas de Leishmania marcadas pela fluoresceína
 IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA

Reação de Imunofluorescência Indireta positiva,

com antígeno de Trypanosoma cruzi.
Considerações Finais

 As técnicas de Imunofluorescência ainda são utilizadas na rotina laboratorial, mas

estão sendo substituídas por testes imunoenzimáticos devido à necessidade de
microscopia, subjetividade de leitura e impossibilidade de automação