Selección,

mantenimiento y
mejoramiento de
microrganismos de
interés industrial
SELECCIÓN
DEBIDO A EL ÉXITO O FRACASO DE UN PROCESO
FERMENTATIVO
Criterios generales
 1.- la cepa a utilizar debe ser genéticamente estable.
 2.-Su velocidad de crecimiento debería ser alta.
 3.- la cepa debe estar libre de contaminantes, incluidas fagos.
 4.- sus requerimientos nutricionales deberían ser satisfechos a partir
de medios de cultivo de costo reducido.
 5.-debe ser de fácil conservación por largos periodos de tiempo, sin
perdida de sus características particulares.
 6.- debería llevar a cabo el proceso fermentativo completo en un
tiempo corto.
 7.- si el objetivo del proceso es un producto, este debería ser alto
Rendimiento y de fácil
extracción del medio de
cultivo
Los microorganismos que se utilizan en un
proceso, pueden ser obtenidos por
aislamientos a partir de fuentes naturales
En algunos casos se dispone de organismos
modificados genéticamente para llevar a cabo
reacciones especificas de biosíntesis,
degradación o biocatalisis, los cuales están
protegidos por patentes.
Elegida la fuente del aislamiento, las posibilidades del éxito
dependen de la técnica elegida para el mismo
A) Aislamiento directo
En este caso es deseable que en el medio que se utiliza para el
aislamiento permita la máxima expresión del material genético
del organismo para la deteccion de productos, factores de
crecimiento tales como aminoacidos y nucleotidos se utiliza la
estimulacion del desarrollo de bacterias auxotrofas por un listado
de organismos. Esto se puede llevar acabo en medo solidos.
En este caso se debe tener una “replica” de la caja a ensayar. Una
vez obtenido el crecimiento en la primera caja, se replica a una
segunda, antes de “matar” las colonias con luz. U.V.
B) Enriquecimiento del cultivo con o sin pretratamiento de la
muestra.
Consiste en incrementar en una población mixta el numero de
organismos de interés en relación al resto. De esta forma se busca
favorecer el crecimiento de un tipo dado de microorganismos
mediante condiciones de cultivo adecuadas al mismo, o de
condiciones inapropiadas para el desarrollo de los otros, logra
mediante el empleo de sustratos específicos o ciertos inhibidos
Selección natural
Se debe tener en cuenta que en cada división hay una pequeña
probabilidad de que ocurra un cambio genético, por lo cual no es
sorprendente que en una gran masa celular la población sea
heterogénea.
Estos cambios definitivos (mutaciones) se deben distinguir de
las variaciones fenotípicas que dependen de las condiciones
ambientales y que tienen lugar en todas las células de la
población que expresan las misma modificaciones fisiológicas,
dentro de las variantes permitidas por su genotipo (el factor
mutagenico se conoce) (tasa de mutación). La frecuencia de
mutaciones espontaneas varia entre 10-6 a 10-9 mutaciones por
genoma y por generación. Por lo tanto si se considera un valor de
10-7 se deberían estudiar un gran numero de organismo (>10 7)
en la búsqueda del tipo deseado.
Mutación inducida
El procedimiento de mutación mediante el empleo de un agente
determinado implica dos etapas, el tratamiento de la población
con el mútagenos elegido y luego el aislamiento de los
mutagenos para su posterior ensayo y selección.
la leccion de un agente mutagenico depende en general de
consideraciones practicas. En algunos de los casos es mas
conveniente el empleo de mas de uno en un lugar del uso masivo
de unos solo. La técnica a emplear puede producir una alta tasa
de mutacion o puede favorecer la separación de un numero
reducido de tipos deseables de un gran numero de productores
mediocres.
C.- descripción de los medios de
fermentación industrial
Preparación de medios para el desarrollo de procesos de
fermentacion es una etapa fundamental para asegurar la
productividad de los mismos.
Los microorganismos varían considerablemente respecto de los
nutrientes que pueden necesitar es posible efectuar la distinción de
las siguientes categorías de componentes, macronutrientes C, N, S,
P, K, y MG y micronutrientes Fe, Mn, Mo, Ca, Zn y Co
1) Propagación de cultivos
Generalmente en un tubo de ensayo que contiene un repique
reciente microorganismo o un tubo liofilizado o congelado donde
se conserva la cepa de interés o de una colonia del
microorganismo previamente seleccionada.
El material biológico seleccionado constituye el punto de partida
con el cual se debe aumentar la cantidad del mismo mediante
sucesivos pasajes en frascos de volúmenes crecientes que son
generalmente operados en agitadores de vaivén o rotatorias en
cámaras de cultivo
2) Fermentación
se siembra el tanque de inoculo que puede tener un volumen de
50, 500 o 1000 1 según la escala industrial posterior su
concentración esta comprendido comúnmente entre 10,00
100,000
3.-Operaciones y procesos de separación y purificación de los
productos
Estas etapas comprenden en forma general y sucesivamente
A) Separación de insolubles por filtración, centrifugación, o
decantación
B) Separaciones primarias por extracción, absorción, adsorción,
ultrafiltración.
C) Purificación por extracción liquido-liquido o extracción a dos
fases acuosas, o cromatografía de afinidad y finalmente
D) Aislamiento del producto
Una sepa de microorganismos debe estar suspendida a su real
capacidad de producción en el fermentado. Es necesario que sea cepa,
altamente productora, no produzca dificultades en la etapa de
separación y purificación es como el caso de cepas de penicillium
chrysogeum que no pueden utilizarse por que producen pigmentos en
encarecen las etapas de purificación .
Los Microorganismos varían respecto a los nutrientes que necesitan
A. macronutrientes, C, N, S, P, K y Mg
B. micronutrientes Fe, Mn, Ca, Zn y Co
C. Factores de crecimiento constituidos generalmente por
componentes orgánicos sumistrados en baja concentración y que
no son sintetizados ni metabolizados por las células, sino
incorporadas a estructuras celulares y de función metabólica por las
células y de funciones metabólicas especifica, como vitaminas,
algunas aminoácidos, ácidos grasos no saturadas etc.
MEDIOS DE CULTIVO
1. Medios sintéticos químicamente definidos
2. Medios complejos sustancias de origen animal o vegetal,
peptonas, extracto de lavadura, macerado de maíz, harina de soja
etc.
Diseño
El diseño de un medio de fermentación tiene como finalidad la
elección de los componentes necesarios para lograr el crecimiento
y la formación de productos correspondientes al proceso a
desarrollar