Universidad Nacional Mayor de San Marcos

(Universidad del Perú, DECANA DE AMERICA)

Facultad de Farmacia y Bioquímica

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Departamento Académico de Famacotecnia y Administración Farmacéutica

FARMACOTECNIA II
SEMINARIO 13: Prueba depirógenos: métodos in vivo: ensayo de pirógenos en conejos y
dentro de los métodos alternativos se destacan la LAL (Lisado de amebocitos Limulus).
Metodología de las pruebas. Criterios de aceptación. Interpretación de resultados

Docente : Q.F. Paul Gutierrez Elescano/Q.F. Denis Garcia Mayta

Integrantes :
Atauqui Guizado, Celia
Ayala Romero, Niki
Simon Rios, Joaquin
Surita Cuba, Katherin
 Prueba de pirógenos en
conejos(método, detección e
interpretación de los resultados)
 HENRY WELCH
CÓMITE DE REVISIÓN DE LA USP
 Prueba de pirógenos
La prueba de pirógenos está diseñada para limitar a un nivel aceptable el riesgo de reacción febril en
pacientes a los que se inyecta un determinado producto. La prueba mide el aumento de la
temperatura corporal en conejos a los que se inyecta una solución de prueba por vía intravenosa.
Este ensayo está diseñado para productos que pueden ser tolerados por conejos en una dosis que no
exceda de 1O mL/kg del peso del conejo, inyectados por vía intravenosa durante un período de no más
de 1O minutos.
BLANCO
0.5 grados o
más

Si la suma del
aumento no
excede 3.3
grados
Lisado de Amebocitos
del Limulus (LAL)
 Método in vitro

Alta Sensibilidad

Endotoxinas
Detecta
bacterianas
 Métodos

Gelificación o
Turbidimétricos Cromogénicos
Gel-clot

De punto final Cinético

Cinético De punto final

Lumilus Amebocyte Lysate
La hemolinfa azul del cangrejo herradura contiene amebocitos con un sistema
de coagulación que detecta la presencia de endotoxinas.

Se produce una cascada de reacciones que forman como producto final un gel,
que atrapa las bacterias inmovilizándolas, aislando la región infectada y
fagocitándolas.
Técnica de coagulación
Concentración mínima de endotoxina requerida para hacer que el lisado se coagule

escinde
Método de Gel-Clot LAL

Ensayo clásico que se basa en que la enzima activada causa gelificación de una proteína coagulable.

Al excederse el valor de la sensibilidad del reactivo LAL se forma un gel (resultado positivo).

Resultados cualitativos: positivo o negativo

Incubar
37°C x 60min
Positivo Negativo

Gel firme que No se forma un gel

permanece en su intacto
lugar
Método Turbidimétrico Cinético LAL

Permite cuantificar la cantidad de endotoxinas de una muestra midiendo el aumento de la turbidez antes de que
se forme el coagulo del gel.

Basada en la producción de turbidez después de la ruptura de uniones de un sustrato endógeno.

Se mide por espectrofotometría a 340nm para detectar la turbidez.

↑Turbidez = ↑ [Endotoxinas]
Método Cromogénico LAL

El método se fundamenta en el uso de un sustrato cromogénico sintético incoloro.

Se basa en el desarrollo de color después de la ruptura de un complejo sintético peptido-cromogeno

Una vez activada la cascada de LAL la enzima coaguladora provoca la liberación de la molécula amarilla de pNA (p-nitroanilina)

↑Coloración amarilla = ↑ [Endotoxinas]

Referencias
PYROSTAR. Comparando el método de LAL con el ensayo de pirógenos en conejos [Sede web] .
[Fecha de revisión: noviembre del 2017]Disponible en: http://www.wakopyrostar.com/blog-
es/post/comparando-el-metodo-de-lal-con-el-ensayo-de-pirogenos-en-conejos/
Perdomo R. Ensayo del lisado de amebocitos del Limulus (LAL). Rev Cubana Farm. Ciudad de la
Habana. 2004; 38(1): 1-20
USP/NF Farmacopea de los Estados Unidos de América. 2015 Vol. 1-A