ENZIMAS

por hernán valle

 2

ENZIMAS
Aminoácidos:
H

R C* COOH

 Definición: NH2
 Catalizadores biológicos;
 Largas cadenas de pequeñas moléculas llamadas
aminoácidos.
 Función:
 Aumentar la velocidad de una reacción química.

 Con excepción de un pequeño grupo de moléculas

de RNA con propiedades catalíticas llamadas
RIBOZIMAS, todas las enzimas son PROTEÍNAS.
 3

CARACTERÍSTICAS
GENERALES

Comparación de enzimas con catalizadores químicos.

Característica Enzimas Cataliz. Químicos

Especificidad de sustrato alta baja

Naturaleza de su estructura compleja simple

Sensibilidad a T y pH alta baja

Condiciones de reacción (T, P e pH) suaves drásticas

Natureza del proceso finito contínuo

Consumo de energia Bajo alto

Formación de subproductos Bajo alta

 4

CARACTERÍSTICAS
GENERALES

Comparación de enzimas con catalizadores químicos.

Característica Enzimas Cataliz. Químicos

Separación catalizador/ productos difícil Simple

Activ. Catalítica (temp. ambiente) alta baja

Presencia de cofactores si No

Estabilidad estructural Baja alta

Energia de Activación Baja alta

Velocidad de reacción alta baja

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CARACTERÍSTICAS
GENERALES

Presentan alto grado de especificidad.

Son altamente eficientes, acelerando la velocidad de

las reacciones (108 a 1011 + rápida).

Reducen la energia de activación.

No son consumidas en la reacción:

Catalasa
H2O2 H2O + O2

E+S E+P
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CARACTERÍSTICAS
GENERALES

 Aceleran reacciones químicas

Catalasa
H2O2 H2O + O2

Ej: Decomposición de H2O2

Condiciones de Energia de Activación Velocidad

Reacción KJ/mol Relativa
Sin catalizador 75,2 1
Platino 48,9 2,77 x 104
Enzima Catalasa 23,0 6,51 x 108
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CARACTERÍSTICAS
GENERALES

Actúan en pequeñas concentraciones

Descompone 5 millones
1 molécula de Catalasa de moléculas de H2O2
en 1 min; a pH = 6,8

Número de renovación = n° de moléculas de sustrato

convertidas en producto por una sola molécula de enzima en una
unidad dada de tiempo.
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CARACTERÍSTICAS
GENERALES

Disminuyen la Energia de Activación.

No alteran el Estado de Equilíbrio: La Keq no cambia.

No se presenta un efecto termodinámico global:

El G no cambia.

Energia de activación sin enzima

Energia de activación con
Diferencia entre S enzima
la energia libre P
de S y P

Avance de reacción
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CARACTERÍSTICAS
GENERALES
Estrutura Holoenzima
Enzimática

Proteína Cofactor

Ribozimas
Apoenzima o Puede ser:
Apoproteína • íon inorgánico
• molécula orgánica
RNA
Coenzima
Si es covalente
Grupo Prostético
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NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN

S.S XIX (Século) → pocas enzimas identificadas.

 Adición de sufijo ”ASA” al nombre del sustrato. Ej:

Grasas (lipo - griego) – LIPASA
Almidón (amylon - griego) – AMILASA

 Nombres arbitrarios:Tripsina y pepsina:PROTEASAS.

1955 - Comisión de Enzimas (EC) de la Unión

Internacional de Bioquímica (IUB)  numerar y
clasificar.
 11

NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN

Cada enzima  código con 4 dígitos que caracteriza

el tipo de reacción catalizada:

Clasificación según la comisión de Enzimas

1er dígito: Tipo de rxn general→ son 6.
CLASE
2° dígito: Tipo de rxn específica.
SUBCLASE
3° dígito: Grupo funcional del sustrato
SUB-SUBCLASE implicado en la reacción.
4° dígito: Tipo de sustrato y código de
SERIE registro.
 12

NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN

1er dígito: Clase → Tipo de rxn general.

1. Oxido-redutasas (reacciones de transferencia de electrones: REDOX)

1.1. actuando en CH-OH 1.4. actuando en CH-NH2
1.2. actuando en C=O 1.5. actuando en CH-NH-
1.3. actuando en C=O- 1.6. actuando en NADH, NADPH

2. Transferasas (transfieren grupos funcionales entre moléculas)

2.1. grupos con un carbono 2.4. grupos glicosil
2.2. grupos aldeído o cetona 2.7. grupos fosfatos
2.3. grupos acil 2.8. grupos conteniendo azufre

3. Hidrolasas (reacciones de hidrólisis)

3.1. ésteres 3.5.otros enlaces C-N
3.2. enlaces glicosídicos 3.6.anidridos ácidos
3.4. enlaceses peptídicos
 13

NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN

4. Liasas (catalizan la ruptura de enlaces covalentes y la remoción de

moléculas de agua, amoniaco y gas carbónico)
4.1. =C=C=
4.2. =C=O
4.3. =C=N-

5. Isomerasas (transferencia de grupos en una misma molécula para

formar isómeros)
5.1. Racemasas

6. Ligasas (catalizan reacciones de formación de nuevas moléculas a

partir de la unión entre dos pre-existentes, consumiendo energia)
6.1. C-O
6.2. C-S
6.3. C-N
6.4. C-C
 14

NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN

2° dígito: Subclase → Tipo de rxn específica.

Ejemplos de Tipo de reacción catalizada Clase

Subclases
Hidratasas Adicionan H2O a insaturaciones Liasas
Quinasas Transfieren -PO3-2 del ATP Transferasas
Mutasas Cambian posición -PO3-2 Isomerasas
Sintasas Síntesis sin ATP Transferasas
Sintetasas Síntesis dependiente de ATP Ligasas
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NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN
Ejemplo de Clasificación:
ATP + D-Glucosa ADP + D-Glucosa-6-fosfato
Clasificación según la comisión de Enzimas
1er dígito: 2 Tipo de rxn general:
CLASE Transferasa
2° dígito: 7 Tipo de rxn específica:
SUBCLASE Fosfotransferasa
3° dígito: 1 Grupo funcional del sustrato:
SUB-SUBCLASE Hidroxilo
4° dígito: 1 Tipo de sustrato:
SERIE D-glucosa

Nombre IUB: ATP-glucosa fosfotransferasa (2.7.1.1)

Nombre común: Hexoquinasa
 16

MECANISMO DE ACCIÓN

• MECANISMO GENERAL

E+S ES P+E

Sustrato se liga al
SÍTIO ACTIVO
de la enzima
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MECANISMO DE ACCIÓN

SITIO ACTIVO: Región de la enzima en la que se da

iila transformación del sustrato en producto.
Puede poseer componentes no protéicos:cofactores.
Posee aminoácidos auxiliares o de contacto.

COFACTOR
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EVENTOS DEL
MECANISMO GENERAL

• FIJACIÓN DE S A E

Emil Fischer (1894): Propuso la hipótesis  La

cerradura y la llave, que considera que la enzima
posee un sitio activo que facilita la unión del sustrato
(Modelo Rígido).
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EVENTOS DEL
MECANISMO GENERAL

• FIJACIÓN DE S A E
Koshland (1958): hipótesis: Ajuste Inducido, La
enzima no acepta simplemente al sustrato, sino que
también exige que el sustrato se distorcione a algo
cercano al estado de transición (Modelo Flexible).
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EVENTOS DEL
MECANISMO GENERAL

• TRANSFORMACIÓN QUÍMICA DE S POR E

 Catalisis covalente

Modificaciones covalentes transitorias originadas por

un fuerte nucleófilo.

 Catalisis Acido-base

Grupos R del sitio activo participan como donadores o

aceptores de protones (ácidos y bases).

 Catalisis metálica

Catalizadores electrofílicos que actúan mediante

estabilización de cargas.
 21

• TRANSFORMACIÓN QUÍMICA DE S POR E

 Catalisis covalente

Lys Lys
LigaseﾐAdenylate
H2N H2N

N NH2 N NH
N O N
P O
P
N O O N N O O
N H2C O H2C
O O O
O
P
+
ATP O
O O
OH O OH OH
OH P O
P
O P O
O
O O
O
 22

• TRANSFORMACIÓN QUÍMICA DE S POR E

 Catalisis ácido-base
 23

• TRANSFORMACIÓN QUÍMICA DE S POR E

 Catalisis ácido-base

RNase A:

 His 12
 Base General
 Abstrae protón del 2’ hidroxilo.

 His 119
 Ácido general
 Dona protón al hidroxilo 5´.
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• TRANSFORMACIÓN QUÍMICA DE S POR E

 Catalisis acido-base
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• TRANSFORMACIÓN QUÍMICA DE S POR E

 Catalisis ácido-base
 26

• TRANSFORMACIÓN QUÍMICA DE S POR E

 Catalisis ácido-base
 27

• TRANSFORMACIÓN QUÍMICA DE S POR E

 Catalisis Metálica
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Cinética ENZIMÁTICA

 Definición:
 CINÉTICA: Estudia las velocidades de reacción
y los p/pios que permiten comprender cómo
suceden las reacciones.
 ¿Cuántos pasos se necesitan?
 ¿Qué p/pios químicos operan en cada paso?
 ¿Cuál es el paso más lento y, por tanto el que
limita la velocidad de la reacción total?.

 Ayuda a elucidar los mecanismos de reacción.

 Y a determinar la función de una determinada
enzima en una ruta metabólica.
 29

CINÉTICA ENZIMÁTICA

 Victor Henri (1903): E + S  ES

1913
Leonor Michaelis -Enzimólogo
Maud Menten - Pediatra

K1 K2
E+S ES E+P
K-1

Etapa rápida Etapa lenta

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Mecanismo general
y ecuación de m-m
La ecuación mínima para la reacción más simple catalizada
por una enzima es:

La velocidad de formación de productos depende de [ES] y de k2:

La [ES] no se puede medir, pero si la [S] y la concentración total

de Enzima:

Entonces: [E] = [Et] – [ES] (Ec. 1)

 31

Mecanismo general
y ecuación de m-m
Además, la velocidad de descomposición y formación de [ES] son
iguales (se supone “Estado Estacionario”):

Luego:

Reordenando: Puesto que:

1/KM
 32

Mecanismo general
y ecuación de m-m
Reescribiendo: ; Reemplazando por [E] = [Et] – [ES]

Tenemos:

Factorizamos [ES], así:

Reordenando: ; Reemplazando [ES] en:

Obtenemos: ;cuando la [S]>>KM :

(saturación de la enzima = velocidad
máxima de la enzima) entonces:

Ecuación de Michaelis - Menten

 33

Significado de km y Vmax

KM: Es la cantidad de sustrato necesario para alcanzar

la ½ de la velocidad máxima.

Cuando KM → 0, es mejor la afinidad de la enzima por

el sustrato.
;V = Vmax
0

Vmáx: Indica que todas las moléculas de la enzima

están ocupadas con el sustrato y están realizando el
paso catalítico.
 34

Gráfico de MIchaelis-
menten (M-m)

Vmax [S]
v=
Km + [S]

v = Vmax [S]
v 1
Km
v = Vmax
2

1- [S]  Km>>[S]
Vmax 3
2 2- [S]  [S]>>Km
3- v = Vmax
2
Km [S]
 35

MÉTODOS GRÁFICOS
para calcular km

 Gráfico de doble inverso de Lineweaver-Burk

Después de reordenar la ecuación de M-M en la forma de una
ecuación de línea recta (y=mx+b),obtenemos:

1 Km 1 Intercepto con el eje 1/v (y)

 
v Vmax [S] Vmax
1
Pendiente v Inclinación =
Km
Vmax

1
Vmax

-1 1
Km [S]
 36

MÉTODOS GRÁFICOS
para calcular km

 Gráfico de Eadie-Hofstee
v
vV K
max m [S]

Vmax

Inclinación = -Km
v

Vmax
Km

v
[S]
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Cinética de la
inhibición ENZIMÁTICA

 Cualquier sustancia que reduzca la velocidad de una

reacción enzimática.

INHIBIDORES
Unidos por interacciones Unidos por interacciones
no-covalentes covalentes

REVERSIBLES IRREVERSIBLES

COMPETITIVOS NO COMPETITIVOS ACOMPETITIVOS

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Inhibición COMPETITIVA

 Inhibidor competitivo compite con el S por el sitio activo de

la E libre.
 I  análogo no metabolizable, derivado de un S verdadero,
S sustituto de la E o un P de la reacción.

I compuestos con estrutura

molecular similar al S

afinidad de la enzima por el

sustrato

[sustrato] necesaria para

obtener la misma [ES]

Km aparente (K’M) de
la enzima. K’M>KM
 39

Inhibición COMPETITIVA
K1
E+S ES K2
E+P
+

I
[ E ][ I ]
KI 
KI [ EI ]
Michaelis-Menten
Vmax[ S ]
v
[I ]
EI K m (1  )  [S]
KI K’
M

Lineweaver-Burk
1 1 Km [I ] 1
  (1  )
v Vmax Vmax K I [S]
 40

Inhibición COMPETITIVA

V’máx= Vmáx
K’M>KM

1- sin inhibidor
2- con inhibidor a una concentración [I1]
3- con inhibidor a una concentración [I2] > [I1]
 41

Inhibición COMPETITIVA

 Ejemplos:
Intoxicación por metanol → antídoto: Etanol. Así:

 La enzima Alcohol deshidrogenasa, cataliza la rxn:

No produce ceguera

 Un exceso de Etanol (sustrato) desplaza al Metanol,

evitando la ceguera:

Metanol Formaldehído Produce ceguera

 42

Inhibición COMPETITIVA

 Ejemplos: Inhibición por medicamentos antihipertensores:

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Inhibición
no-COMPETITIVA

 Se une a un sitio específico alterando la forma del

sitio activo y por tanto disminuye la unión del sustrato.

I no tiene semejanza
estructural con el S

[substrato] no diminuye la
inhibición

Km de la enzima NO se altera

Vmax con la presencia del

inhibidor
 44

Inhibición
no-COMPETITIVA
KS K2 [ E ][ I ] [ ES ][ I ]
E+S ES E+P KI  
[ EI ] [ EIS ]
+ +
I I
KI KI
KS
EI + S EIS
Michaelis-Menten
Vmax [ S ]
v
K m (1 
[I ] [I ]
)  [ S ](1  )
KI KI
Lineweaver-Burk
1 Km [I ] 1 1 [I ]
 (1  )  (1  )
v Vmax K I [ S ] Vmax KI
 45

Inhibición
no-COMPETITIVA

V’máx< Vmáx
K’M=KM

1- sin inhibidor
2- con inhibidor a una concentración [I1]
3- con inhibidor a una concentración [I2] > [I1]
 46

Inhibición
aCOMPETITIVA

 Se une a ES formando un complejo ternario no

productivo ESI.

I no tiene semejanza estructural

con el S

Si se aumenta la [S], habría más

[ES] disponible para unirse a I.

Entonces, se refuerza el efecto

Inhibidor de I.

Km y Vmax de la enzima
 47

Inhibición
aCOMPETITIVA
KS K2
E+S ES E+P
+
[ ES ][ I ]
I KI 
[ EIS ]
KI
Vmax
[S]
EIS 1
[I ]
Ki
v
Michaelis-Menten Km
 [S]
[I ]
1
KI

1 Km 1 1 [I ]
Lineweaver-Burk   (1  )
v Vmax [ S ] Vmax KI
 48

Inhibición
aCOMPETITIVA

V’máx< Vmáx
K’M<KM

1- sin inhibidor.
2- con inhibidor a una concentración [I1]
3- con inhibidor a una concentració [I2] > [I1]
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Mecanismos de
regulación enzimática

 La capacidad de adaptación de los organismos ante

EIinfluencias externas e internas: BIORREGULACIÓN.
 Esto se logra por la interconversión de las formas activas
E e inactivas de las proteínas (enzimas).

MECANISMOS DE REGULACIÓN ENZIMÁTICA

MODIFICACIÓN COVALENTE ALOSTERISMO

REVERSIBLE IRREVERSIBLE ZIMÓGENOS

FOSFORILACIÓN REDOX ADENILILACIÓN

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• MODIFICACIÓN COVALENTE REVERSIBLE

 FOSFORILACIÓN
 Cinasas: Transfieren un -PO3-2 del ATP a Ser, Tre y Tir (-OH).
 Fosfatasas: Eliminan el fosfato por hidrólisis del R fosforilado.
 Por lo general la fosforilación activa la enzima.
 El cambio de –OH por –OPO3-2, ↑ la polaridad ⇒cambia la
 conformación ⇒ influye en la actividad de la Enzima.

E E
 51

• MODIFICACIÓN COVALENTE REVERSIBLE

 OXIDO-REDUCCIÓN
 Formación o eliminación de enlaces disulfuros –S-S- entre los
grupos R de las cisteínas.
 Esto causa un cambio de conformación que influye en la
actividad de la Enzima.
 52

• MODIFICACIÓN COVALENTE REVERSIBLE

 ADENILILACIÓN
 Transferencia de un grupo adenilato desde un ATP
 Esto causa un cambio de conformación que influye en la
actividad de la Enzima.
 53

• MODIFICACIÓN COVALENTE
iiiIRREVERSIBLE

 ZIMÓGENOS:
 Son proteínas precursoras inactivas (carecen de
iiiiSitio Activo).
 Sufren modificaciones por Proteasas que los
iiiitransforman en su formas activas.
 54

ENZIMAS alostéricas

 Funcionan a través de la unión no covalente

iiireversible de un metabolito regulador llamado
iiimodulador.

 Moduladores pueden ser inhibidores o activadores.

 Son mayores y más complejas, poseen dos o más

iiicadenas polipeptídicas.

 No siguen la cinética de Michaelis-Menten.

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ENZIMAS alostéricas

Subunidad Catalítica

Subunidad Reguladora
 56

ENZIMAS alostéricas

1- Comportamiento tipo Michaelis-Menten.

2- Comportamiento Alostérico.
 57

isoZIMAS

 Las distintas formas moleculares de una enzima que

iiicatalizan la misma reacción se denominan isoenzimas.

 Ejemplo: Lactato deshidrogenasa (7 tipos celulares)