Métodos de cuantificación e introducción a

los métodos de extracción

El paso más importante en un estudio es determinar el propósito, y
por lo menos una noción de los resultados finales. Debe
proporcionar datos que proporcionen información útil para resolver
el problema en cuestión.

Método de
cuantificación
• La forma en la
Propósito cual va a
• Cualitativo establecer la
• Cuantitativo cantidad de
analito.
• Semicuantitativo

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 CALIBRACIÓN METODOLÓGICA:
Operación que permite relacionar la señal analítica con la
concentración/composición de la sustancia/s que se está analizando

MÉTODOS DE CALIBRADO:
Calibrado completo
Calibrado simplificado
Calibrado con “escalas auxiliares”

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Métodos de calibrado completo:
Implican la obtención de una “función de calibrado” que define la
respuesta equivalente a concentraciones conocidas del componente
analizado. Una vez conocida esta función, se utiliza su inversa (Función
analítica) para determinar la concentración a partir de la señal
instrumental obtenida.

12
y
Pueden ser: 10

8
•DIRECTO o INTERPOLACIÓN 6 Función de calibrado
•ADICIÓN DE PATRÓN 4

2
•PATRÓN INTERNO 0
x

0 1 2 3 4 5

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 DIRECTO o INTERPOLACIÓN

Procedimiento
1) Se preparan n disoluciones patrón de analito de
concentraciones crecientes y que estén dentro de la zona útil de
medida
2) Se les mide la señal instrumental
3) Se representan los datos señal/concentración
4) Se ajustan los datos a una recta (recta de calibrado) 
5) Se le mide la señal instrumental a la muestra (SM)
6) Se determina la concentración de analito (CM) en la muestra por
interpolación en la recta de calibrado

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 Limite de linealidad
Señal 

SM 

Limite de cuantificación
 y  mx  b
 (m y b por mínimos cuadrados)

CLQ CM CLL [Analito]

SM  b
SM  m  CM  b  C M 
m

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Este método de análisis se aplica en la determinación de un analito,
en el cual los componentes de la matriz de la muestra como
también los reactivos usados en la preparación de la misma no
interfieren en el análisis.

También se puede emplear en condiciones tales que la contribución

de los interferentes, sobre las medidas se mantiene constante, con
lo cual se puede realizar la oportuna corrección del error
determinado por el interferente.

En una curva de calibración solo es permitido la interpolación, esto

es, la determinación de la concentración dentro de los parámetros
de la curva, no es permitido extrapolar.

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METODO MINIMOS CUADRADOS

𝑛 σ 𝑥𝑖 𝑦𝑖 − σ 𝑥𝑖 σ 𝑦𝑖 σ 𝑦𝑖 − 𝑎 σ 𝑥𝑖
𝑚= 𝑏=
𝑛 σ 𝑥𝑖 2 − σ 𝑥𝑖 2 𝑛
𝑛𝜀 𝜀
∆𝑚 = ∆𝑏 =
𝑛
𝑛 σ 𝑥𝑖 2 − σ 𝑥𝑖 2

𝑛 σ 𝑥𝑖 𝑦𝑖 − σ 𝑥𝑖 σ 𝑦𝑖
𝑟=
𝑛 σ 𝑥𝑖 2 − σ 𝑥𝑖 2 𝑛 σ 𝑦𝑖 2 − σ 𝑦𝑖 2

𝒚 = (𝒎 ± ∆𝒎) + (𝒃 ± ∆𝒃)
𝑛 = 𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠
𝜀 = 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟

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Si r = -1 todos los puntos se encuentran sobre la recta existiendo una
correlación que es perfecta e inversa.

Si r = 0 no existe ninguna relación entre las variables.

Si r = 1 todos los puntos se encuentran sobre la recta existiendo una

correlación que es perfecta y directa

1 200 260 220

3 500 550 490
6 900 1170 1000
10 1500 1950 1400
20 3400 3500 3200
23 3800 4200 3500
35 6000 6200 5800

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 1 200 260 220
3 500 550 490
6 900 1170 1000
10 1500 1950 1400
20 3400 3500 3200
23 3800 4200 3500
35 6000 6200 5800

7000
171.66 y = 175.01x + 96.992
175.01 169.67 6000 R² = 0.9989

162.34 6.57 5000

y = 171.66x - 74.661
R² = 0.9982
4000
y = 162.34x - 42.737
-74.66 3000
R² = 0.9954
96.99 -6.80 2000
-42.74 91.29
1000

0
0 5 10 15 20 25 30 35 40

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 ADICION ESTANDAR- CALIBRACION ADICION PATRON
La preparación de estándares que reproduzcan la composición de la muestra es
muy complicada cuando se trata del análisis de muestras complejas (suelos,
minerales, sangre completa, orina, etc.) ya que en este tipo de muestras,
usualmente, los componentes de la matriz afectan las medidas de la señal
analítica ya sea por exceso o por defecto. Por ello, es imposible compensar un
blanco distinto de cero

Procedimiento adicion estandar sobre volumen

1) Se toman n alícuotas de la muestra (VX, CX)
2) Se añaden a las alícuotas volúmenes variables de una disolución patrón
(VS(n)) y se enrasa a un mismo volumen (VT)  ¡Ojo!, la analito tiene que
estar dentro de la zona útil
3) Se les mide la señal instrumental a las n disoluciones preparadas
4) Se representan los datos señal/volumen de patrón adicionado (VS(n))
5) Se ajustan los datos a una recta (p.e. por mínimos cuadrados) 
6) El punto de corte con el eje x da la concentración de la muestra diluida (C’M)
7) Se determina la concentración de la muestra original (CM)

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Señal 
 CS VX C X

y  mVS  b m b

VT VT
VX C X VS CS

y  m

CS
VT VT b VX C X
C’X 0 VS(n)

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 Señal
y  mx  b



 b
 0  m  x  b  x  C'X 
m

VT
CX  C'X 
C’X 0 CS(n)
VX
Adicionalmente, cuando se tiene un gran número de muestras
para analizar, es posible realizar la determinación usando solo dos
soluciones, una que corresponde a la muestra sin adición de
estándar y otra con adición de estándar.
Es necesario indicar que previo a la aplicación de este tipo de
calibrado, se debe investigar el intervalo de linealidad del método
de análisis de tal manera, que los resultados estén dentro del
rango de linealidad.

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En este caso se pueden seguir dos procedimientos experimentales,
en el primero la muestra problema a la cual se le mide la respuesta
instrumental en ausencia de estándar esta en un volumen total que
solo corresponde al volumen de muestra (VM). Luego se le agrega a
la solución de la muestra un volumen de solución estándar (VS) de
concentración conocida (Cs) de tal forma que el volumen final (Vf)
en la muestra con adición de estándar corresponde a la suma de Vs+
VM

Un segundo procedimiento que ser puede llevar a cabo, implica la

dilución de la muestra en ausencia de estándar y la muestra en
presencia del estándar a un volumen final constante (VT).

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Se ha propuesto en la literatura que cuando se utiliza la curva de
calibrado con adición de estándar, es conveniente la realización de
una curva de calibrado para el blanco, en la cual están incluidos
todos los reactivos y la solución patrón a diferentes
concentraciones, excepto la muestra.

La finalidad de este tipo de calibrado es comprobar la contribución

real de los reactivos a la señal del analito. En este caso el intercepto
en el eje x, corresponde al contenido de analito en los reactivos

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Para la determinación de aluminio en muestras de agua de río, se utilizó el
método de adición de estándar. En todos los casos se empleo un volumen de
muestra de 10 mL a las cuales se les adiciono una solución patrón (S) de aluminio
0,15 mM. Por último, todas las soluciones se diluyeron a un volumen final de 25
mL, y se obtuvieron los resultados presentados en la tabla 4.

señal Cs mM
MUESTRA 5 0

MUESTRA + 2 ml S 10.1 1.2

MUESTRA + 4 ml S 15.1 2.2

MUESTRA + 6 ml S 20 3.6

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 ESTANDAR INTERNO- CALIBRACION POR PATRON INTERNO
La calibración con estándar ó patrón interno se utiliza para
compensar errores aleatorios y sistemáticos como interferencias
no espectrales de componentes de la matriz, fluctuaciones debidas
del método y errores instrumentales .
Se selecciona como estándar interno, una sustancia diferente del
analito que presente propiedades similares a las del analito, tal que
ambos sean afectados similarmente durante el análisis.
También puede seleccionarse un componente mayoritario que este
presente en la muestra, y el cual se adiciona a los patrones a
elevada concentración para considerarse constante. La matriz debe
estar libre de estándar interno. El paso más importante en este
método, es la selección adecuada del estándar interno

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Procedimiento
1) Se adiciona estándar en la misma cantidad a la muestra antes de
realizar algún proceso previo
2) Se prepará una curva de calibración agregando siempre la misma
cantidad de patrón interno con una concentración cercana a la del
analito de interés
3) Se obtienen las señales y se representan los datos
señal/concentración con respecto a la del patrón interno Vs
concentración analito
4) Se le mide la señal instrumental a la muestra (SM)
6) Se determina la concentración de analito (CM) en la muestra por
interpolación en la recta de calibrado

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 S M / S P  AREL  m  CM  b 
AREL  b
CM 
m
En la determinación de benceno (C6H6) por cromatografía usando como detector
la espectroscopia de masa, se utilizo el benceno deuterado (C6D6) como patrón
interno, ambos salen casi al mismo tiempo y se obtuvieron los resultados
siguientes
Solución (C6H6), ppm (C6D6), ppm Señal (C6H6) Señal (C6D6)
1 1 10 304 2992
2 5 10 3520 6145
3 10 10 3025 2819

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