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LOS ANDES
“MICROBIOLOGÍA CLÍNICA”
OBJETIVOS
Depósito aséptico.
Esterilización de instrumentos.
Métodos de Cultivo:
Siembra en Placas: Con el asa se toma una gota del
producto patológico, depositar junto al
agar.
Siembra en Tubos: Muestra se lleva al fondo del tubo,
luego extenderla.
Siembra por Picadura: El inóculo con el asa se introduce
hasta el fondo, flamear la boca.
EXAMEN MICROSCÓPICO
Examen de muestras:
Al fresco: observación de muestra entre porta y cubreobjeto.
Frotis teñido: apreciar morfología y disposición del gérmen.
A) TINCIÓN GRAM
Técnica:
Cubrir con el porta, fijar con cristal violeta, esperar 1-2 ',
lavar.
Cubrir porta con lugol, esperar 1-2 ', lavar.
C) TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN
Tinción utilizada para gérmenes ácidos resistentes.
Técnica:
Cubrir la preparación con fucsina,calentar hasta que emita vapores,
repetir 3v/5 '.
Botar el colorante y lavar con agua.
Int :
Los bacilos ácido-alcohol resistentes se observan como bastoncitos
rojos y largos en un fondo azul claro.
HEMOCULTIVO
HEMOCULTIVO
Cultivo de sangre y aislamiento del agente causal.
Bacteriemia: Bacterias se multiplican y superan la capacidad del
SER, capaz de remover éstas del torrente sanguíneo.
Entrada de bacterias al torrente sang. en infecciones intravasculares:
fístula AV, dispositivos como catéteres y agujas.
Indicaciones:
Fiebre >38ºC o hipotermia <36ºC, leucocitosis >10,000 x lt.
Infecciones endovasculares, endocarditis
Drogadicción endovenosa
Obtención de Muestra :
Lavado de manos,colocar ligadura y campo estéril, localizar vena.
Antisepsia de la piel con Oh 70% por 30“, haciendo círculos
concéntricos hacia el exterior . Luego con Yp al 10%.
Dejar secar antiséptico por 1‘, desinfectar el tapón de goma del
frasco.
Colocarse los guantes y extraer la muestra.
Inyectar directamente la sangre en el frasco.
Mover el frasco para que sangre y medio de
cultivo se mezclen.
No pegar etiqueta sobre el código de barra.
Volúmen de Muestra :
Introducir en la botella 10ml...........adultos.
1-5 ml por frasco............Neonatos y niños.
Nº de Muestras :
Dos hemocultivos, intervalo de extracciones de
1 hora. En urgencias hasta 15min.
Pueden extraerse 2 muestras simultáneas de
diferentes sitios de punción.
Transporte:
Enviar en forma inmediatamente al laboratorio.
Mantener a Tº ambiente. NUNCA refrigerarse ni congelarse.
CATÉTERES INTRAVASCULARES
Transporte :
La muestra deberá enviarse al
laboratorio en un periodo inferior a
30 minutos.
Cuando esto no sea posible conservar
a 4ºC por 12 horas como máximo.
MUESTRAS DEL TRACTO
RESPIRATORIO
A. MATERIAL
- Bajalenguas ( imprescindible)
- Hisopo de algodón con medio
B. TÉCNICA DE OBTENCIÓN
DE LA MUESTRA
- Enjuagar la boca con agua
destilada estéril o solución salina.
- Obtener el esputo tras una
expectoración profunda luego de
un esfuerzo de tos,
preferentemente matinal.
- La muestra debe provenir del
sector bajo del tracto respiratorio.
D. TRANSPORTE Y CONSERVACION
- Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).
E. OBSERVACIONES
- Es preferible realizar la toma antes de tratamiento antibiótico.
- No es útil para anaerobios.
- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia.
- La expectoración debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad
suficiente (> 25 leucocitos PMN y < 10 células epiteliales por
campo 100x).
- Baciloscopía: Recoger 3 muestras en 3 días sucesivos. Mientras
conservar en la heladera a 4ºC hasta el tercer día y llevar las 3
muestras juntas al laboratorio.
UROCULTIVO
A. MATERIALES
- gasas estériles.
- jabón neutro.
- recipiente de boca ancha con tapa de rosca
hermético y estéril.
BOLSAS RECOLECTORAS
- Este sistema se utiliza en niños y ancianos . se coloca
un recolector desechable y estéril donde e recoge la
orina.
C. VOLUMEN MÍNIMO DE LA MUESTRA
- Es suficiente un volumen de orina de 5-10 ml.
D. TRANSPORTE
-La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una
hora. Cuando esto no sea posible debe refrigerarse a
4ºC durante un tiempo máximo de 12 horas.
E. OBSERVACIONES
- Para la búsqueda de micobacterias, la orina se recoge
por técnica de chorro medio, durante 5 días
consecutivos. En este caso el volumen de orina no debe
ser inferior a 300 ml por muestra. Se elegirá
preferentemente la primera micción de la mañana.
VOLUMEN DE LA
MUESTRA
VOL.
DETERMINACION (ml)
VOLUMEN MÍNIMO
ESTUDIO BACTERIOLÓGICO RUTINARIO : 1 ML
HONGOS O MICOBACTERIAS : 2 ML ADICIONALES MÁS POR CADA UNO DE LOS ESTUDIOS, SIENDO
DESEABLE LLEGAR A LOS 10 ML
PARA ESTUDIO DE VIRUS SE NECESITA AL MENOS 1 Ó 2 ML MÁS
-S. pneumoniae, pueden lisarse rápidamente a partir de una hora tras su recogida.
-Nunca deberá refrigerarse pues se puede afectar la viabilidad de N. meningitidis y H. influenzae.
- Las muestras para el estudio de virus se enviarán en hielo, si el envío se retrasa más de 24 horas, se deberá de
conservar a -70ºC
TINCIONES :
Se debe efectuar una tinción de Gram en busca de bacterias Una tinción de Ziehl
Neelsen en busca de BAAR y una tinción para buscar hongos .
CULTIVOS:
Se siembra con asa estéril o pipeta pasteur estéril , una placa de Agar Sangre, +
una placa de Agar Chocolate c/ suplemento y/o una placa de Agar Thayer
Martin si hay sospecha de Neisseria.
Estos medios se deben incubar a 35°C por 72 hrs. En atmósfera de 5% de CO2 .
A estos medios se debe agregar un tubo de Medio Tioglicolato el cual se incuba
por 5 días en anaerobiosis.
VOLUMEN MÍNIMO
Heces formadas o pastosas: al menos 1 ó 2 gr. para virología, añadir de 2 a 4 gr. más.
Heces líquidas: entre 5 y 10 ml.
TRANSPORTE
- Enviar la muestra en un recipiente estéril si se va a procesar en el plazo de 1 ó 2 horas
después de su emisión.
- El frío puede afectar la viabilidad de Shigella spp.
- Para el estudio de toxinas de C. difficile, la muestra se puede mantener hasta 48 horas en
refrigeración, congelada a -20ºC se puede mantener indefinidamente.
- Es preferible enviar las muestras para estudio virológico sin medio de cultivo, pues este
diluye las partículas virales disminuyendo la sensibilidad.
- Para el estudio de parásitos es útil además, enviar una muestra pequeña en un medio fijador.
Una parte en dos de fijador de alcohol polivinílico.
AS Oxidasa +; Indol + Aeromonas spp
35ºC
Mc
35ºC
No fementadoras
de lactosa
SS
KIA Movilidad Urea Indol
35ºC No fermentadoras
Salmonella K/As + - -
de lactosa;
productoras de SH2 Shigella K/A - - -
Yersinia K/A -(37º)/+(25ºC) + -
VB
35ºC No fermentadoras
de lactosa
Examen en fresco
Campy Morfologia espiral Hidrólisis del Campylobacter
42ºC Oxidasa +
Movilidad helicoidal hipurato + jejuni
microaerofilia
Todas las muestras que se contaminen con las bacterias de la flora normal
deben ser rechazadas:
Torunda de garganta o nasofaringe o cualquier sitio de la mucosa oral.
Esputo expectorado.
Lavados bronquiales.
Torundas vaginales, cervicales o uretrales.
Torundas de abscesos.
Heces o torundas rectales (excepto para C. difficile).
Aspirados:
Cualquier aspirado de un sitio normalmente estéril es aceptable.
Desinfección adecuada del sitio.
Con aguja y jeringa. NUNCA con torunda.
Se debe expulsar el aire que quede en la jeringa.
Transporte rápido al laboratorio (tapón de hule estéril) o inoculación de medios
PRAS.
RECOLECCIÓN DE MUESTRAS
1. SELECCIÓN DE MUESTRAS
Abscesos:
Con aguja y jeringa, NO con torunda.
Si son profundos deben ser aspirados
con catéter o por procedimientos
quirúrgicos.
Si son orales, se aísla la zona con
algodón y se limpia con torunda y
alcohol. Luego se aspira con aguja.
Ulceras superficiales:
Desinfección del sitio y debridación del
tejido expuesto (por flora aerobia
contaminante).
Colección del material en la zona
profunda de la úlcera.
Si la úlcera es purulenta, se puede
aspirar el material.
1. SELECCIÓN DE MUESTRAS
Cámara de anaerobiosis.
Incubadora, para medios PRAS (“sellados”).
Evacuación y reemplazo.
Jarra o bolsas de anaerobiosis2 a 3 hr. para lograr anaerobiosis.
NUNCA abrir la jarra antes de 48 hr.
Incubar de 5 a 7 días, hasta 3 semanas (Actinomyces).
¿QUÉ SUGIERE EL CRECIMIENTO DE
ANAEROBIOS EN PLACAS DE CULTIVO?