POLIHIDROXIALCANOATOS

Son polímeros lineales.

Bioplasticos termoestables, sintetizados por
bacterias.
Sustitos atractivos de los poliéster de origen
petroquímico.
BIOSINTESIS
A NIVEL CELULAR
IMPORTANCIA
 • LOCALIZACION
1

• METODOLOGIA
2

• DISCUSIONES Y
3 RESULTADOS
 LOCALIZACION
 El sitio para el muestreo de suelos, ubicado en la vereda El
salado, municipio de Guarne (Antioquia) (06°16´50´´N y
75°26,3´37´´O).
 METODOLOGIA

1. AISLAMIENTO Y
PURIFICACION.
2. IDENTIFICACION DE
BACTERIAS PRODUCTORAS
DE PHAs.

3. IDENTIFICACION
TAXONOMICA DE LAS
BACTERIAS PRODUCTORAS
DE PHAs. 4. CARACTERIZACION
QUIMICA DE PHAs.
AISLAMIENTO Y PURIFICACION
 IDENTIFICACION DE BACTERIAS
PRODUCTORAS DE PHAs

Tinción rojo de Nilo. Tinción azul de Nilo.

Fluorescencia Microscopio fluorescente Ostle y Holt (1982)

 DETECCION POR PCR DE phaC
ARREGLOS GENÉTICOS

• Tipo l

PHA Sintasa 𝛽 𝑐𝑒𝑡𝑜𝑡𝑖𝑜𝑙𝑎𝑠𝑎

Acetil CoA
Reductasa

(R Eutropha)
 Despolimerización
de PHA

 Tipo ll

Acetil CoA
Reductasa
PHA Sintasa
( Pseudomonas SP)
  Tipo lll

PHA Acetil CoA

Sintasa Reductasa

𝛽 𝑐𝑒𝑡𝑜𝑡𝑖𝑜𝑙𝑎𝑠𝑎

(Chromatium Vinosum) (Thiocystis Violaceae)

Tipo lV

Acetil CoA
PHA Sintasa Reductasa

Synechocystis Sp
LISIS CELULAR
 Termica

PREPARACION DEL COCTEL

 Vt= 25µL (0,1µM de cada cebador, 1U
de Taq ADN polimerasa, 0,1mM de
cada dNTP, buffer 1x de enzimas, 2.5
mM de MgCl2 al 5% y 3µL de lisado
bacteriano).

PROGRAMA DE AMPLIFICACIÓN
 Desnaturalizacion (94°C por 4 min), 35
ciclos (94°C por 30 seg, 60°C por 45
seg, 72°C por 75 seg y una final a
72°C por 10 min)
ELECTROFORESIS
 Gel de Agarosa 1,5 %
 Buffer TBE 1x
 AGENTE INTERCALADOR Bromuro de Etidio 3µL.

VISUALIZACION DE LA CORRIDA

Bio Doc Analyze. Kit QIAquick PCR purification

 ABI Prism 3730xl

BlastN BioEdit 6.0.6

(Hall 1999)
 IDENTIFICACION TAXONOMICA

Cebadores Secuencia
PA 5'AGA GTT TCC TGG CTC AG 3'
Pc5B 5' TAC CTT GTT ACG ACT T 3'
TINCIONES Y PRUEBAS

GRAM + ESPORULADAS

GRAM + NO ESPORULADAS
 CARACTERIZACIÓN QUÍMICA DE PHAs

50ml MMS 5ml inoculo T 30ºc 150rpm