Professional Documents
Culture Documents
REACCIóN DE BIURET
Reactivo :
ØEl reactivo de Biuret está formado por una disolución de
sulfato de cobre (CuSO4), en medio alcalino (NaOH, KOH).
Mecanismo de Reacción :
ØLa producen los péptidos y las proteínas , pero no los
aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace
peptídico (- CO - NH -) que se destruye al liberarse los
aminoácidos.
02/19/11 2
eaccion en el Laboratori
Trabajo con la Albumina
PROCEDIMIENTO: LA ALBUMINA LA ENCONTRAMOS EN LA CLARA D
vEn un tubo de prueba deposita 2ml
de solución de albumina.
vAdicionar 1 ml de una solución de
NaOH al 10% y luego añadir una gota
de solución de sulfato de cobre al
1% CuSO4 . En pocas palabras
añadir el reactivo de Biuret .
BIURET
REACCION
POSITIVA DE LA
ALBUMINA ALBUMINA
02/19/11 3
VIDEO REACTIVO DE BIURET
02/19/11 4
REACCIóN CON NINHIDRINA
Reactivo :
ØLa Ninhidrina es un poderoso agente
reactivo común para visualizar las bandas
de separación de aminoácidos su formula
química es C9-H6-O4
Mecanismo de Reacción :
ØTiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de
aminoácidos libres. Los aminoácidos , en general reaccionan
con la Ninhidrina cuando son calentados con un exceso de la
misma
02/19/11 5
eaccion en el Laboratori
Trabajo con la Albumina 1
PROCEDIMIENTO:
ALBUMINA
Baño
María
02/19/11 6
REACCIóN XANTOPROTEICA
Reactivo :
ØEmplea ácido nítrico concentrado, es un líquido
corrosivo, tóxico, que puede ocasionar graves
quemaduras.
Es utilizado comúnmente como un reactivo de
laboratorio. Su formula es HNO3 .
Mecanismo de Reacción :
ØEsta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos .
Esta reacción se debe la presencia de un grupo fenilo en la
molécula proteica. Los complejos de la molécula proteica que son
de importancia en esta reacción son la tirosina y el triptófano.
02/19/11 7
eaccion en el Laboratori
Trabajo con semillas de aceituna
PROCEDIMIENTO:
02/19/11 8
vCalentamos el tubo de ensayo con
un mechero hasta que la reacción
tenga un color amarillo. Una vez
calentada la reacción la enfriamos
en agua fría ( el color amarillo de
la reacción es debido a la reacción
de las proteínas con el ácido
nítrico concentrado).
02/19/11 9
lubilidad de las Proteína
ØANALISEMOS LOS PARAMETROS QUE AUMENTAN LA PROBABILIDAD DE
SOLUBILIDAD.
02/19/11 10
SOLUBILIDAD : CONCENTRACIóN DE SALES
ØLa solubilidad de una proteína es sensible a la concentración
de sal. la concentración de sal se expresa en términos de fuerza.
La solubilidad de una proteína a baja fuerza iónica
generalmente aumenta con la concentración de sal. El
salting in es el fenómeno por el cual la concentración de sal
aumenta la solubilidad de la proteína. A altas fuerzas iónicas, la
solubilidad de la proteínas disminuye, este fenómeno es conocido
como salting out.
02/19/11 11
Las proteinas generalmente tiene muchos grupos ionizables,
los que tienen una variedad de pK. Cada proteina tiene un pH
caracteristico al cual las cargas posivitivas se encuentran
en igual cantidad a las cargas negativas, a este pH se
conoce como punto isoelectrico, pI, el cual puede ser
conocido atraves del isoelectroenfoque. En el pI las
proteinas tienen una solubilidad minima y son insensibles
al salting in. La solubilidad se incrementa cuando el pH se
aleja del pI.
http://www.pucmmsti.edu.do/cienciasfisiologicas/BQMA-SIB2.PDF
02/19/11 12
snaturalización de Proteína
En bioquímica, la desnaturalización es un cambio estructural de
las proteínas o ácidos nucleícos, donde pierden su estructura nativa,
y de esta forma su óptimo funcionamiento y a veces también cambian
sus propiedades físico-químicas.
02/19/11 13
La desnaturalización de las proteínas se da por dos motivos en
general los cuales son el cambio de temperatura o variación en
el pH.
Temperatura
ØCuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética
de las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa
de las proteínas, y se desnaturalizan. Asimismo, un aumento de la
temperatura destruye las interacciones débiles y desorganiza la
estructura de la proteína, de forma que el interior hidrofóbico
interacciona con el medio acuoso y se produce la agregación y
precipitación de la proteína desnaturalizada.
02/19/11 14
otencial de Hidrogeno ( Ph )
ØLos iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero
además de afectar a la envoltura acuosa de las proteínas también
afectan a la carga eléctrica de los grupos ácidos y básicos de
las cadenas laterales de los aminoácidos. Esta alteración de la
carga superficial de las proteínas elimina las interacciones
electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria y a
menudo provoca su precipitación. La solubilidad de una proteína
es mínima en su punto isoeléctrico, ya que su carga neta es cero
y desaparece cualquier fuerza de repulsión electrostática que
pudiera dificultar la formación de agregados
02/19/11 15
esnaturalización por cambio de P
02/19/11 16