PRACTICA # 1

FRACCIONAMIENTO
SUBCELULAR
¿QUÉ ES EL FRACCIONAMIENTO
SUBCELULAR?
 Es la extracción de un homogeneizado de los
órganos o tejidos.
 Este homogeneizado esta formado por las células
rotas de los órganos o tejidos.
 El homogeneizado debe ser conservado en una
solución que le brinde el medio adecuado para la
conservación de los organelos.
METODO:
 CENTRIFUGACION DIFERENCIAL:
 Consiste en someter el homogeneizado a
diferentes velocidades en la centrifuga para
lograr separaciones, basadas en la diferencia
de densidades y tamaño y peso de los
organelos.
 Este tipo de centrifugación debe hacerse a
una temperatura de 4°C.
MATERIALES:
 Hígado de pollo  Tubos de ensayo
 KCl 0.154 M  Gradilla

 Tijera  Licuadora

 Jeringa  Centrifuga

 Algodón  Balanza

 Placa Petri  Embudo

 Vaso de precipitados
EXTRACCIÓN DE BIOMOLÉCULAS Y
ORGANELOS.
1° colocamos el hígado 2° inyectar KCl 0.154M
en la placa Petri. hasta que expulse los
residuos de sangre
hasta quedar de un
color claro.
3° en la misma placa, 4° agregarle la misma
triturar con una tijera. cantidad de KCl 0.154M y
llevarlo a la licuadora para
homogeneizar.
5° filtrar el 6° centrifugar a 1000g
homogeneizado y luego durante 10’.
colocarlo en los tubos de
ensayo y posteriormente
contrapesar para colocarlo
en la centrifuga.
7° retirar de la centrifuga
y extraer el sobrenadante
en otro tubo de ensayo y
conservar el sedimento,
donde se encuentran las
células y núcleos.
8° colocar el sobrenadante
nuevamente en la
centrifuga a 10000g
durante 30’.
9° retirar nuevamente
el centrifugado y
extraer el
sobrenadante, que en
este caso es la Fracción
Mitocondrial, donde se
encuentran las
mitocondrias y
lisosomas.
DISCUSIÓN:
 El producto obtenido no tuvo un alto porcentaje
de rendimiento, debido a que el hígado utilizado
no era lo suficientemente fresco, y debido a esto
los organelos y células pueden haber muerto y
por la temperatura del medio donde nos
encontrábamos.
CONCLUSION:
 Finalmente se pudo extraer lo suficiente como
para identificar en el sedimento las celular y
núcleos, en la primera centrifugada, y las
mitocondrias y lisosomas, en la segunda
centrifugada.