Professional Documents
Culture Documents
INTRODUO
Micotoxinas y Mykes : Fungo. y Toxicum : Veneno ou toxina. As micotoxinas so metabolitos secundrios com elevada toxicidade. A contaminao de alimentos com
PATULINA
A patulina uma micotoxina termoresistente tambm chamada clavicina, claviformina ou expansina. Aspergillus clavatus y Penicillium espansum y Byssochlamys nivea
y
Apresenta estabilidade em cidos diludos e resistente temperatura de 125C na faixa de pH entre 3,5 e 5,5.
Histrico
Histrico
y
Aspergillus clavatus, Penicillium espansum e Byssochlamys nivea 1941 - ao como antibitico e posteriormente por suas propriedades fitotxicas e carcinognicas; 1953, estudos sobre o possvel uso teraputico para combater enfermidades humanas mas observou-se que esta micotoxina era txica para ser utilizada como agente antimicrobiano; 1961- carcinogenicidade em bovinos, sunos, coelhos e ratos; Distrbios respiratrios e motor.
y -
Efeito txico caracterizado por: distrbios respiratrio e motor, espasmos, asfixia, hemorragia no pulmo e crebro Alm disso, tem ao teratognica
Esta micotoxina tem sido detectada em frutas, sucos, vegetais e outros cereais mas a maior fonte de contaminao so as mas e produtos derivados da ma.
Exposio Patulina
Exposio Patulina
Empregada como indicador de qualidade nos frutos e produtos de ma (MOSS, 1996) Limite mximo permitido de at 50 g/L, recomendado pela Organizao Mundial de Sade (OUGH; CORISON, 1980) Se desenvolvem nas regies da fruta que sofreram danos por pragas ou ao mecnica, formando focos de apodrecimento Estudos no provam conclusivamente os efeitos da patulina na sade humana
O comrcio interno de suco de fruta em torno de 5 a 7 litros anuais por habitante Insignificante quando comparado com a Europa e os Estados Unidos, onde o consumo de sucos de fruta chega a 30 litros anuais por habitante Consumo dirio de suco de ma no Brasil por pessoa de 0,3 g (GEMS, 2003) Ingesto Diria Tolervel Provisria (PTDI) = 0,4 Qg/kg p.c./dia (JECFA, 1995) o segundo suco mais consumido no mundo
A atividade biolgica da patulina instvel em meio alcalino porm apresenta estabilidade em cidos diludos, resistente temperatura de 125C A Patulina est associada a danos no trato gastrointestinal, incluindo lceras e inflamao do estmago e intestino
Sintomas agudos podem incluir agitao, convulses, congesto pulmonar, edema, ulcerao, degenerao de clulas epiteliais e danos nos rins
y
Toxicocintica e Toxicodinmica
Absoro
y
Distribuio
Biotransformao
y
Fgado o rgo mais lesado resultando numa srie de danos ao metabolismo das protenas, carboidratos e lipdeos.
Ncleo do hepatcito inibio da enzima RNA- polimerase, inibindo a sntese protica Mitocndria ocorre aumento permeabilidade, interrompendo o transporte de eltrons inibindo a respirao celular. No retculo endoplasmtico ocorre a degranulao com ruptura dos polissomos inibindo muitas funes metablicas, como sntese de protenas, induo de enzimas e interferindo na coagulao sangunea pela inibio de fatores.
Armazenamento
y
Tecido Adiposo
Fgado
rgos reprodutores
Rins
Excreo
y y
Sete dias aps a ingesto da toxina ainda recuperada excretado cerca de 87%
36% na urina
Toxicodinmica
Micotoxina
Membrana celular
DNA ou RNA
Biossntese de patulina
1 acetil-Coenzima A e 3 malonil-Coenzima A
cido 6-metilsalicilico sintetase (6-MAS sintetase)
m-cresol
m-cresol hidrolase
lcool m-hidroxibenzil
lcool m-hidroxibenzil desidrogenase
Mtodos de deteco de patulina: Cromatografia em camada delgada (CCD) Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) Cromatografia gasosa (CG) Eletroforese capilar (EC).
1. 2. 3. 4.
1.
Extrao lquido-lquido (ELL): Partio da amostra entre duas imiscveis, orgnica e aquosa.
fases
2.
Extrao em fase slida (EFS): Separa amostras a serem analisadas usando uma fase slida e uma lquida
Tipo adsoro Fase mvel: soluto Fase estacionria: slido altamente polar A distncia que cada um corre geralmente expressa em valor de Rf (fator de reteno).
Visualizao: 1. Mtodo no-destrutivo: utiliza lmpada de UV. 2. Mtodo destrutivo: utiliza um reagente apropriado que produz uma cor caracterstica.
y y
A anlise de cromatografia em camada delgada nos permite obter um perfil ("fingerprint") da amostra.
Aplicao na placa
Desenvolvimento: cuba
Visualizao
Revelao
Fase mvel: lquida Fase estacionria: dividida Para ter um fluxo razovel, opera a presses elevadas Utiliza-se colunas metlicas e fase mvel pressurizada, obtida com o auxlio de bombas de alta presso Os detectores mais empregados so os fotmetros no UV e os espectrofotmetros UV/VIS
Principio bsico: tcnica de separao e anlise de misturas por interao dos seus componentes entre uma FASE ESTACIONRIA e uma FASE MVEL.
A amostra injetada e arrastada pela fase mvel atravs da coluna que contem a fase estacionaria, onde ocorre a separao da mistura. Aps serem separadas as amostrar vo para um detector que vai quantificar o material.
Instrumentalizao:
Inerte: apenas transporta a amostra pela coluna. Puro: isenta de impurezas que possam contaminar a amostra. Compatvel com o detector.
Quimicamente inerte a amostra. Volatilidade baixa. Estabilidade trmica. Pouco viscosa. Pura. Caractersticas prximas das dos solutos a serem separados. Seletividade deve ter um bom solvente diferencial dos componentes da amostra. As FE mais usadas: silicones, poliglicis e polisteres.
Eletroforese Capilar
y
Principio bsico: Transporte em soluo eletroltica de compostos carregados eletricamente sob a influncia de um campo eltrico, no qual a separao entre dois solutos ocorre de acordo com as diferenas entre suas mobidades eletroforticas. H diversos modos de separao: Cromatografia eletrocintica micelar (MEKC),Isotacoforese Capilar (CITP),Focalizao Isoeltrica Capilar (CIEF), Eletroforese Capilar em Gel (CGE), Eletrocromatografia Capilar (CEC), no entanto o mais utilizado o Eletroforese Capilar de Zona (CZE).
Instrumentalizao:
Na eletroforese de zona, a migrao das espcies ocorre pela combinao dos efeitos dos fluxos eletroosmtico e eletrofortico que so gerados quando o campo eltrico aplicado. Ao passar uma soluo alcalina atravs do capilar, adquire uma carga negativa. Uma camada de contra-ons formada prxima parede (eletroneutralidade) Dupla camada eltrica que possui uma camada compacta (fixa) e outra difusa (mvel).
O fluxo eletrofortico direcionado ao eletrodo de carga contrria ao analito. Todas as espcies presentes do analito sero direcionadas para o sistema de deteco pelo fluxo eletroosmtico. A separao: mobilidades inicas dos analitos = densidades de carga.
y y
Tempo de migrao. Introduo da amostra capilar: Hidrodinmica e eletrocintica possvel obter picos com alta definio (resoluo), pois os efeitos de alargamento dos picos so mnimos. no existe de fase estacionria diminuindo o efeito de alargamento, causado pela transferncia de massa entre as fases estacionria e mvel. O fluxo eletroosmtico gerado uniformemente ao longo de todo o capilar e migra de forma segmentada. A resoluo do capilar depende como em outras tcnicas cromatogrficas, do nmero de pratos tericos
Consideraes finais:
y
Perigo inerente de contaminao pela toxina. Pesquisas quanto as caractersticas biolgicas e qumicas da patulina possibilitou o avano em mtodos de quantificao, preveno e tratamento. O estudo da patulina de grande interesse para a segurana alimentar.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
y
WELKE, Juliane Elisa; HOELTZ, Michele; DOTTORI, Horacio Alberto; NOLL, Isa Beatriz. Ocorrncia, aspectos toxicolgicos, mtodos analticos e controle da patulina em alimentos. Cincia Rural, v.39, n.1, p.300-308, jan-fev, 2009. Disponvel em: http://www.scielo.br/pdf/cr/v39n1/a52v39n1.pdf. Acesso em: 28 de maro de 2011. SILVA, Debora Sequinatto Monteiro da. Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC) publicado em 22/10/2009. Disponvel em: http://www.webartigos.com/articles/19831/1/Cromatografia-Liquida-de-Alta-EficienciaHPLC-/pagina1.html#ixzz1JaclJdsT. Acesso em: 15 de abril de 2011. Teoria Geral sobre Eletroforese Capilar. Disponvel em: http://www2.dbd.pucrio.br/pergamum/tesesabertas/0212144_06_cap_02.pdf. Acesso em: 15 de abril de 2011 SONGSERMSAKUL, P.; RAZZAZI-FAZELI, E. A Review of Recent Trends in Applications ofLiquid Chromatography-Mass Spectrometry for Detection of Mycotoxins. Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies 31: 1641 1686, 2008. SANTANA, A.S.; ROSENTHAL, A.; MASSAGUER, P.R. The fate of patulin in apple juiceprocessing: A review. Food Research International 41: 441-453; 2008.
WOROBO, R.W.; MOAKE, M.M.; PADILLA-ZAKOUR, O.I. Comprehensive Review of Patulin Control Methods in Foods. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety 1: 8 21; 2005 e referncias a citadas. ROSS G. , Patulina : Parmetros que influem na produo, de toxicao e consideraes sobre microbiota fungica em maa .Londrina ,1995 Tese ( Mestrado ) Universidade Estadual de Londrina . GRIFFIN; D. H. Fungal physiology. 2. ed. Nova York: Wiley-Liss, 1993. MOSS, M. O. Fungi, quality and safety issues in fresh fruits and vegetables. Applied Microbiology, Oxford, v. 104, n. 5, p. 1239-1243, 2008. ENGEL, G.; TEUBER, M. Patulin and other small lactones. In: BETINA, V. Mycotoxins: production, isolation, separation and purification. Amsterdam: Elsevier Science, 1984. p. 290-299. GNALEZ, E.; PINTO, M. M.; FELICIO J. D. Anlise de micotoxinas no instituto biolgico de 1989 a 1999. Biolgico, So Paulo, v. 63, n. 1-2, p. 15-19, jan./dez.,2001. GKMEN, V.; ACAR, J. Incidence of patulin in apple juice concentrates produced in Turkey. Journal of Chromatography A 815: 99 102, 1998. HOPKINS, J. The toxicological hazards of patulin. Food and Chemical Toxicology, Oxford, v. 31, n. 6, p. 455-459, 1993.
OBRIGADO!