Estudio de las BACTERIAS

Morfologa, estructura y clasificacin de las bacterias. Coloraciones: Simple y diferencial. Medios de cultivo: tipos, usos e importancia.

Blgo. Yury Cruzado Torres

LAS BACTERIAS Son un grupo diverso de microorganismos unicelulares, procariotas, que se pueden encontrar prcticamente en cualquier ambiente (suelos, aguas, aire, y como simbiontes, parsitos, o patgenos del hombre, otros animales y plantas. Son los organismos ms pequeos que contienen toda la maquinaria requerida para su crecimiento y autorreplicacin a expensas del material alimenticio.

La mayora de las bacterias tienen un rango de tamao que va de 0,2 a 1,2 m de dimetro y de 0,4 a 14 m de longitud.

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Forma y ordenamiento de las Bacterias La forma de las bacterias no es constante y, a menudo, una misma especie adopta distintos tipos morfolgicos, es lo que se conoce como pleomorfismo. Existen tres tipos fundamentales de bacterias:

Los cocos o formas esfricas: En grupo de dos: Diplococos En cadena: Estreptococos Agrupaciones irregulares (racimos): Estafilococos En forma de bastoncillo, son los bacilos Formas helicoidales: espiroquetas espirilos vibrios

A: Bacilo B: Estreptococo C: Estafilococo D: Diplococo E: Espirilo F: Bacilo en forma de coma (Vibrio)

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Morfologa y Estructura bacteriana Las bacterias son microorganismos Procariotas de organizacin muy sencilla. La clula bacteriana consta de: Citoplasma: Presenta un aspecto viscoso, y en su zona central aparece un Nucleoide que contiene la mayor parte del ADN bacteriano. En algunas bacterias aparecen fragmentos circulares de ADN con informacin gentica , dispersos por el citoplasma: son los Plsmidos. La membrana plasmtica presenta invaginaciones, que son los mesosomas, donde se encuentran enzimas que intervienen en la formacin de la molcula energtica (ATP), y los pigmentos fotosintticos en el caso de bacterias fotosintticas. En el citoplasma tambin se encuentran inclusiones de diversa naturaleza qumica. Por ejemplo: Grnulos de volutina o grnulos metacromticos que son de polifosfato. Se tien de color prpura con azul de metileno y se usan para identificar ciertas bacterias. Glbulos de Azufre, sirven de reserva de energa para aquellas bacterias que oxidan el sulfuro de hidrgeno. Poseen ARN y ribosomas caractersticos, los cuales realizan la sntesis de protenas.
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En ciertas bacterias se pueden reconocer dos tipos de apndices superficiales: 1. flagelos que son rganos de locomocin. La disposicin de los flagelos sobre la superficie de la bacteria difiere en las distintas especies y constituye un carcter taxonmico importante.

Clasificacin de las bacterias segn la disposicin de los flagelos.

2. pili (Latn: cabellos), conocidos tambin como fimbriae (Latn : flecos). muy numerosos y cortos. Se has descrito dos tipos de pili: pili comunes: son filamentos rgidos, cortos y numerosos 100 a 200 por bacteria; tienen capacidad de adherencia al ltex, glbulos rojos y epitelios, entre otros. pili sexuales: a diferencia de los pili comunes son largos, flexibles y poco numerosos, de 1 a 4 por bacteria. Son los encargados de la transferencia del material gentico (ADN) de una clula a otra, en el proceso de apareamiento bacteriano llamado conjugacin (Reproduccin Parasexual).

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Algunas bacterias tienen la facultad de producir un cuerpo oval de pared gruesa que corresponde a una clula de alta resistencia llamada Esporo, segn su localizacin en la clula pueden ser:
Exoesporos: se localizan externamente a la clula, como en el genero Estreptomyces. Endoesporos: se encuentran dentro de la clula ubicndose en diferentes posiciones y son producidos por los generos Bacillus, Clostridium y Sporosarcinas. Estas presentan las siguientes propiedades:

No presentan actividad metablica Gran resistencia al efecto del calor Gran resistencia al efecto de las radiaciones Gran resistencia al efecto de los productos qumicos

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La Capsula , presente en algunas bacterias, es una capa mucosa, viscosa que varia de espesor, protege a las bacterias que la poseen de la fagocitosis, lo cual favorece su multiplicacin y facilita la invasin del organismo infectado

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LA PARED CELULAR BACTERIANA es una estructura rgida que mantiene la forma caracterstica de cada clula bacteriana. Dependiendo de las especies y de las condiciones de cultivo, la pared celular puede suponer desde el 10% al 40% del peso seco de la clula
las paredes celulares no son estructuras homogneas sino que poseen distintas capas que varan segn el tipo de bacteria, existiendo diferencias tanto en su grosor como composicin. Estas diferencias se utilizan para identificar y clasificar las bacterias, as como diferenciarlas mediante la tincin de Gram. La pared celular de las bacterias Gram (-) es ms delgada que la de las Gram (+). Tanto las bacterias Gram (+) como las Gram (-) poseen un heteropolmero conocido como peptidoglucano o murena.
Nacetilglucosamina (NAG)

PEDTIDOGLUCANOS

. Acido Nacetilmurmic o (NAM)

Pptido de 4 aminoacidos

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Pared celular de las bacterias Gram (+): Contiene una sola capa compuesta de peptidoglucano y cidos teicoicos que son polmeros de glicerol o ribitol fosfatos que se unen al peptidoglucano o a la membrana citoplasmtica

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Pared celular de las bacterias Gram (-): Contiene dos capas, una membrana externa y una capa de peptidoglucano. El espacio que existe entre la membrana citoplasmtica y la membrana externa se denomina espacio periplsmico. La capa caracterstica de las Gram (-) es la membrana externa que acta como barrera selectiva al paso de algunas sustancias. Su estructura bsica es una bicapa lipdica que contiene fosfolpidos (capa interna), lipopolisacridos y protenas (capa externa). Esta bicapa est unida al peptidoglucano a travs de lipoprotenas. De todos estos componentes, los lipopolisacridos (LPS) son caractersticos de las bacterias Gram (-) y slo se encuentran en la membrana externa.

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MEDIOS DE CULTIVO Y COLORACIN BACTERIANA

Medio de Cultivo

Es toda sustancia o conjunto de sustancia que en condiciones apropiadas y estril permite el transporte, desarrollo o propagacin, el aislamiento y preservacin de un microorganismo bacteriano

Los medios de cultivo tienen diferentes utilidades:

- Aislamiento de bacterias presentes en una muestra - Para investigacin e identificacin de bacterias - Para anlisis metablicos y bioqumico de la bacterias - Estudios culturales para evaluar caractersticas de las colonias y poblaciones bacterianas, segn el estado agregativo del medio - Para realizacin de estudios de sensibilidad a los antibiticos (antibiograma) - Para preservacin de bacterias (Cepario) - Para produccin de vacunas bacterianas - Para produccin de toxinas bacterianas

MEDIOS DE CULTIVO REQUERIMIENTOS

ENERGTICOS: - Fuentes de carbono - Fuentes de nitrgeno NO ENERGTICOS: - Fuentes de azufre - Fuentes de fsforo - Agua - Iones metlicos - Factores de crecimiento - Factores de arranque - Factores inhibidores - Factores solidificantes: agar, gelatina

COMPONENTES DEL MEDIO CULTIVO

Un medio de cultivo debe contener en forma asimilable un fuente nitrgenada (Protenas peptonas), fuente de carbono (Hidratos de carbono lpidos), distintas sales minerales y agua
En algunos casos debe contener factores de crecimiento para microorganismos exigentes (Ej. vitaminas, sangre, extractos de carne o levadura, etc) De acuerdo al estado agragativo se puede agregar agentes solidificantes (agar o gelatina).

Debe ser estril, isotnico, poseer propiedades buffer, un pH ptimo y un potencial xido reductor determinado.

MEDIOS DE CULTIVO CONDICIONES

Las condiciones que ha de cumplir un medio de cultivo para que un microorganismo crezca son:

* Composicin de nutrientes adecuada a las necesidades del microorganismo

* Condiciones fsico-qumicas apropiadas: - Temperatura ptima - Grado de humedad adecuado - pH - Presin osmtica - Presencia o ausencia de oxgeno

MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN

SEGN SU COMPOSICIN Y ORIGEN: - Empricos o naturales - Sintticos - Semisintticos - Complejos SEGN SU CARACTERSTICAS Y USO: - Comunes o bsicos - Enriquecidos - Diferenciales - Selectivos - De transporte

MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN

SEGN SU ESTADO AGREGATIVO: - Lquidos - Semislidos - Slidos Los medios slidos o semislidos pueden contener los mismos ingredientes que los medios lquidos, pero poseen adems agentes solidificantes como agar o gelatina.

MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN

Medio sinttico: Son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente.

Medio mnimo: Son los medios que presentan la minima cantidad de nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos.

Medio complejo: Son medios con nutrientes de composicin qumica variable o no establecida. Son mezclas complejas y poco definidas de sustancias. Se preparan a partir de extractos animales, vegetales, etc.
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MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN

SEGN SU PRESENTACIN: - Deshidratados o liofilizados - Medios preparados - Medios slidos en placa de petri - Medios slidos en tubo - Medios lquidos en tubo - Medios semislidos en tubo - Medios de doble fase en frasco

MEDIOS DE CULTIVO CLASIFICACIN

Medio enriquecido: Medio que se enriquece con nutrientes y se utiliza para microorganismos exigentes. Agar sangre . Agar Suero.
Medio selectivo: Medio que permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el desarrollo de otros. Agar sales-manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos Staphylococcus). Medio diferencial: Permite revelar caractersticas metablicas-fisiolgicas de los microorganismos. Agar Mac conkey (permite visualizar la fermentacin de lactosa por viraje de un indicador de pH). Medios de transporte: Se utilizan para el transporte de muestras biolgicas, manteniendo la viabilidad del microorganismo. Medio de Stuart, Cary y Blair, Amies y Douglas, etc

MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo

Cuando se desean cultivar bacterias es necesario tomar en cuenta los componentes nutritivos, sales, humedad y las condiciones fsicas como son el pH, el oxgeno, la luz y la temperatura.

MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo

pH Una bacteria puede alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las degradacin de sustancias producidas por la propia bacteria; por ejemplo: Utilizacin de carbohidratos ----> Produccin de cidos orgnicos ----> Acidificacin Catabolismo de protenas ----> Produccin de materiales nitrogenados ----> Alcalinizacin Estos cambios pueden inhibir el crecimiento de la bacteria. Estos cambios se pueden controlar mediante sistemas tampn. Uno de los ms utilizados en microbiologa es la combinacin de KH2PO4 y K2HPO4 tamponando el medio a un pH de prximo a 6,8.

MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo

O2 Las bacterias en su conjunto presentan una respuesta variable al oxgeno libre clasificndose en cinco grupos: Aerobias: Bacterias que crecen en presencia de oxgeno libre. Anaerobias: Bacterias que crecen en ausencia de oxgeno libre. Anaerobias facultativas: Bacterias que crecen en presencia como en ausencia de oxgeno libre. Aerotolerantes: Son bacterias que pueden tolerar o soportar el oxgeno y crecer en su presencia an cuando no lo utilizan. Microaerfilas: Bacterias que crecen en presencia de pequeas cantidades de oxgeno libre.

MEDIOS DE CULTIVO Condiciones de cultivo

Suministro de luz
Los organismos fotosintticos debern ser expuestos a una fuente de iluminacin ya que la luz es su fuente de energa.

Condiciones de cultivo: Temperatura

Cada bacteria tiene una temperatura ptima de crecimiento clasificndose en los siguientes grupos:
Psicrfilas: Desarrollan a 0 C o menos. Su temperatura ptima es alrededor de los 15 C. Mesfilas: Crecen mejor entre 25 y 40 C. Termfilas: Crecen mejor entre 50 y 75 C dentro de este grupo las Hipertermfilas: Crecen prximas a 100 C.

MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS EN PLACA DE PETRI

AGAR SANGRE EN PLACA DE PETRI