PCR

Polymerase Chain Reaction/Reaccin en Cadena de la Polimerasa

Qu es la PCR?

Es una forma simple y rpida de multiplicar ADN, in vitro obteniendo como resultado millones de copias de una determinada secuencia de ADN.

Historia

El inventor de esta tcnica fue el Dr. Kary Mullis, por lo que gan el Premio Nobel de Qumica en 1993.
El trabajo fue para la amplificacin del gen de la globina humana y el diagnstico prenatal de anemia falciforme. A partir de este momento, la tcnica de PCR ha revolucionado los estudios de microbiologa y biotecnologa.

Mullis se bas en la replicacin del ADN en organismos eucariontes por medio de la ADN polimerasa.

La ADN polimerasa realiza la sntesis de una cadena ADNc en el sentido 5-3 usando un molde de cadena sencilla, pero a partir de una regin de doble cadena.
Para crear esta regin se utilizan primers, que son oligosacridos complementarios a los nucleotidos de la cadena de ADN que se desea amplificar.

Qu se necesita para que funcione el PCR?

Cuando realizamos una reaccin de PCR simulamos lo que sucede en una clula al momento de sintetizar el ADN y en el tubo se mezclan los ingredientes necesarios para que la sntesis del fragmento se lleve a cabo. Los ingredientes son: la polimerasa, el ADN del organismo a estudiar, oligonucleotidos, dNTPs y buffer.
El siguiente paso es poner los tubos en un termociclador.

Cmo funciona la PCR?

El termociclador bsicamente funciona calentando y enfriando los tubos a temperaturas muy precisas, esto ocurre tres veces y se conocen como ciclos.
La Taq polimerasa se une al ADN de doble cadena y comienza a copiar en sentido 5-3

Primer Ciclo

Se sintetizan los primeros fragmentos de ADN, se obtienen cantidades pequeas.

Segundo Ciclo

Los oligonucletidos se unen al ADN y a los fragmentos recin sintetizados en el primer ciclo.

Tercer Ciclo

Se continua el mismo proceso del segundo ciclo, por lo que la extensin del ADN aumenta.

Tipos de Tcnicas

PCR anidada: El producto se utiliza como molde para otra

amplificacin.

PCR in situ: Es una reaccin de PCR en clulas, permite amplificar

secuencias muy cortas.

PCR mltiplex: Amplifica ms de una secuencia en una misma

reaccin.

PCR con transcriptasa inversa: Utiliza ARN en lugar de ADN y emplea una transcriptasa inversa.
PCR en tiempo real: Permite cuantificar la cantidad de cido nucleico
al mismo tiempo que la amplificacin, utiliza fluorocromos.

Aplicaciones

Investigacin. Medicina. Paleontologa, antropologa biolgica, y ciencias forenses. Agronoma y diversidad.

Para ver e sta pelcu la, d ebe disponer de QuickTime y de un descompresor YUV420 codec.

Referencias

Espinosa Asuar, Laura. Gua prctica sobre la tcnica de PCR. Disponible en: http://www2.ine.gob.mx/publicaciones/libros/530/cap17.p df The PCR Song Interpretado por Scientists for Better PCR, dirigido por Brison: http://www.youtube.com/watch?v=_zxr52KwKo&feature=related