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ralegria@conacyt.gob.sv
CONTENIDO:
OBJETIVO
Presentar informacin bsica de manera comprensible sobre la Biologa Molecular y sus aplicaciones tcnicas.
Tcnicas del ADN recombinante Modelos Vegetales Nuevas: protenas, plantas, animales, alimentos, frmacos Biotecnologas promisorias
1979-81 genes humanos clonados y secuenciados 1982 Tabaco, la primera planta modificada genticamente 1983 Kary Mullis concibe el PCR / Fred Sanger y colegas 1986 1987 1995 1996 1998 1999 2000 2000 2001
publican la secuencia del lambda La secuenciacin del ADN es automatizada Inicia el Proyecto del Genoma Humano Es secuenciado la bacteria Haemophillus influenzae Es secuenciada la levadura Saccharomyces cerevisiae Es secuenciado el nemtodo Caenorhabditis elegans Es secuenciado el cromosoma 22 humano Es secuenciada la mosca de la fruta D. melanogaster / 26 de junio se presenta 90% borrador genoma humano 14 de dic. secuencia de Arabidopsis thaliana 26 de enero borrador genma del arroz Oriza sativa
BIOTECNOLOGA
Cultivo de Clulas Vegetales Diagnsticos
Frmacos Anti-cncer
Solucin de crimenes Tecnologa del ADN Bancos de ADN, ARN Protenas Mapas de Genomas completos
Biologa Molecular
Ingeniera Gentica
Sntesis de Nuevas Protenas Nuevas Plantas y Animales Nuevos Alimentos Nuevos Antibiticos Clonacin Produccin de Protenas humanas Recursos humanos qumicos raros Terapia Gnica
Marcadores
GENMICA
IBM SP Supercomputadora
El genoma es la suma total del material gentico presente en un organismo particular, incluye el ADN presente en los cromosomas y en los organelos subcelulares (ej., mitocondrias) y el genoma de ARN de algunos virus.
El anuncio el 26 de junio de 2000, del borrador del genoma humano en un 90%, marc un hito histrico para la humanidad.
genes estn presentes dentro del ADN de un organismo. Genmica Funcional. El estudio de que funciones son conferidas a un organismo por una secuencia gnica dada. Genmica Qumica. Se usa para comparar dos organismos de la misma especie (uno de los cuales tiene un gen o genes inactivados por un qumico especfico o una mutacin puntual. Anlisis de la Expresin Gnica. Se usa para determinar el producto o productos producidos (tales como una enzima u otra protena crtica). Cuando un determinado gen es activado, se mide la fluorescencia de las molculas de ARN mensajero (ARNm) individual, cuando este ARNm hibridiza (con piezas de ADN correspondientes a las protenas producidas/analizadas, que estn adheridas a la superficie de hibridizacin sobre un biochip).
El genoma de un organismo es el juego completo de ADN. La planificacin del Proyecto Genoma Humano se inici en 1986, previsto para el 2007. En Junio de 2000 se present el 90% del borrador con la secuenciacin de unos 30,000 genes y 3 mil millones de pares de bases (pb). Los genes son secuencias especficas de bases que codifican instrucciones para hacer protenas. Los genes son un 2% del genoma humano.
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en 0.2% 60% De 289 genes humanos implicados en enfermedades, hay 177 cercanamente similares a los genes de Drosophila.
GENOMAS
IDENTIDAD GENTICA
70%
20%
95% idntico
CONACYT 2002
GENOMAS VEGETALES
El 14 de diciembre de 2000, se present la secuencia del genoma completo de la primera especie vegetal la Arabidopsis thaliana. El 26 de enero de 2001, el borrador de la secuencia del arroz (Orizae sativa). El funcionamiento de los genes en el arroz se aplicara a cultivos principales, tales como trigo (Triticum spp) y maz (Zea mays) con genomas mas grandes y ms dificiles de secuenciar. El arroz es el genoma mas simple y pequeo de los genomas de todos los cereales, tiene 50,000 genes, dos veces el de Arabidopsis, y 12 cromosomas comparado con cinco de
Arabidopsis.
GENOMAS VEGETALES
GENOMAS VEGETALES
La Compaa SYNGENTA (suiza), ha demostrado la utilidad de la genomica al utilizar la secuencia QTL 21 del cromosoma 1 del genoma del maz (el cual fomenta la produccin de la planta), encontrando un arreglo y orden de genes bastante similar con el existente en la variedad japonica o Nipponbare del arroz que ellos secuenciaron. Pamela Ronald, Fitopatloga Vegetal de la Universidad Davis de California, usando una secuencia de la variedad de arroz indica, secuenciada por el Instituto de Genmica de Beijing y el Centro de Genoma de la Universidad de Washington, identific un gen de resistencia a las enfermedades en arroz, cuya caracterstica fenotpica ha sido usada por cientos de aos por los fitomejoradores sin conocer su procedencia gentica.
R. ALEGRA CONACYT 2002
En la 14th International Genome Secuencing and Analysis Conference (oct. 2002), US Genomics Inc., present un aparato que lee la doble hlice de ADN sin cortarlo. Abre la doble hlice espiral de ADN, la lineariza y la pasa por un escaner para leerla en un lector fijo (como una plicula de carrete pasa por un proyector), las molculas se mueven a 30 M de bases por minuto. En 40
Si el sistema se logra pasar a un biochip el tiempo bajar a menos de cinco minutos, por la habilidad de capturar un Terabyte (1024 o 1000 gigabites, un gigabite = 1024 o 1000 Megabites) de informacin cada pocos segundos.(Uehling, M. D, BioIt World Nov. 12 2002).
ADN ARN
ADN
PROTENAS
los genes contienen instrucciones para hacer protenas
ADN
protenas
las protenas actan solas o en complejos para realizar las funciones celulares
ESTRUCTURA DE UN GEN
Tradicionalmente, un gen se ha definido como un segmento de ADN que codifica para un polipptido o para una molcula funcional de ARN.
Molcula de ADN
Recientemente, los nuevos descubrimientos han alterado radicalmente esta visin, para adoptar una definicin ms vaga. De acuerdo con ello, un gen es una secuencia de ADN genmico o de ARN que es esencial para especificar una determinada funcin. Para llevar a cabo su funcin el gen no necesita ser traducido a protena, y a veces ni siquiera necesita R. ALEGRA CONACYT 2002 ser transcrito.
ESTRUCTURA DE UN GEN
Elementos tpicos: 1) regin reguladora o promotor basal (caja TATA). o sitios de unin de proteinas reguladoras (upstream promoter). o Realzadores (enhancers) o Silenciadores
8) seal de poli-adenilacin.
ESTRUCTURA DE UN GEN
Los promotores pueden ser genricos o tejido especfico
< 100 Kb
La funcin del gen depende de los FACTORES de TRANSCRIPCIN (FT) que activan a las ARN pol. Los FT son: los Factores de Transcripcin General (se unen a secuencias promotoras genricas) y los Activadores de Transcripcin (se unen a secuencias promotoras especficas). Los FT pueden activarse o desactivarse en respuesta a estmulos del entorno del organismo.
Marcadores Genticos
PCR ADNc Sondas de ADN Sntesis Gnica Gel Electroforsis Secuenciacin de ADN
DE TRANSFERENCIA GENTICA
1. Agrobacterium. Uso de la bacteria Como "Ingeniero Gentico". La bacteria conteniendo el inserto, infecta las clulas de la planta produciendo la recombinacin gentica. 2. Acelerador de Partculas (Gene Gun). Un can artificial bombardea micropartculas con el inserto, sobre la clula. 3. Electroporacin. Uso de carga elctrica para que el ADN atraviese la membrana nuclear. 4. Polietilenglicol. Exposicin de las membranas al PEG, facilita el movimiento de las molculas de ADN. 5. Silicon Wiskers. Inyeccin con fibras microscpicas, que atraviesan las membranas con los insertos.
R. ALEGRA CONACYT 2002
DE TRANSFERENCIA GENTICA
6. Microinyeccin. Una clula es adherida a una pipeta bajo un microscopio y el ADN forneo es inyectado directamente en el ncleo usando una micropipeta muy fina. Se usa cuando hay pocas clulas disponibles, tales como clulas fertilizadas de huevo animal. 7. Liposomas. Los vectores pueden ser encapsulados en pequeas vesculas de membrana para introducir el ADN in vivo en la clula.
R. ALEGRA CONACYT 2002
DE TRANSFERENCIA GENTICA
En 1999 se usaron agujas de vidrio huecas con puntas de 1m de dimetro, bajo la gua de un microscopio para inyectar ADN directamente en cloroplastos. Dichas puntas finas no daan la membrana del cloroplasto, pero es requerida una alta presin para sacar el ADN de la aguja. El control del flujo de ADN bajo alta presin es un problema prctico significativo, que ha sido superado introduciendo un metal lquido en la aguja atrs del ADN. Cuando la aguja es calentada el metal se expande forzando al ADN a salir de manera controlada. Los investigadores tambin han usado esta misma tcnica para introducir ADN en bacterias individuales y ncleos de clulas eucariticas (www.ncbe.reading.ac.uk/NCBE/PROTOCOLS/DNA/PDF/DNA 01).
Ingeniera Gentica:
MODELOS VEGETALES Las plantas que se usan como modelos de aprendizaje en Ingeniera Gentica Vegetal son: Arabidopsis thaliana, Nicotiana tabacum (tabaco), Orizae sativa (arroz) y Solanum tuberosum (papa).
Estos modelos son tiles para aprender haciendo y ayudar a resolver problemas identificados por los agricultores nacionales, mientras se capacitan los miembros de los Centros o Unidades de Investigacin que se quieran preparar.
R. ALEGRA CONACYT 2002
diferentes condiciones ambientales de estrs. Se insertaron dos genes fusionados de trehalosa de E. Coli y un promotor tejido especfico dependiente del estrs. Los genes de trehalosa permiten la produccin de arroz an si est estresado por frio, sequa o altos niveles de salinidad e incrementa la produccin en 20%. La composicin qumica de los granos no cambia. El azcar trehalosa ayuda a estabilizar molculas biolgicas: lpidos, enzimas y otras protenas, en organismos en condiciones de estrs (PNAS Online, 27 nov. 2002).
Produccin de protena C humana en leche de cerdos, para desrdenes como hemofilia. Hormonas de crecimiento humano en tejido seminal de cerdo.
Antitrombina humana III, anticoagulante sanguneo secretada en leche de cabras transgnicas. Cabras transgnicas para producir BioSteel fibra hecha por el hombre con propiedades de tela de araa.
PAPA con la vacuna que previene la insulina dependencia de la diabetes mellitus 100 veces ms poderosa que la actual vacuna. PAPA con la sub-unidad B antignica de la enterotoxina del Vibrio cholerae causante del clera). FRIJOL de SOYA con anticuerpos que protegen contra el virus 2 de Herpes simplex (HSV). TABACO con anticuerpos que previenen la caries dental producida por
Streptococcus mutans.
Ingeniera Gentica
CLONACION
Trmino genrico para la replicacin en un laboratorio de genes, clulas u organismos de una entidad original, con copias genticas exactas del gen, clula u organismo original. Esta tcnica ha producido avances sensacionales en medicinas y vacunas. Tambin hay investigacin en clonacin de clulas humanas, rganos y otros tejidos. Esto puede producir el reemplazo de piel, cartilagos y hueso para victimas de quemaduras y R. ALEGRIA CONACYT 2002 accidentes, o de rganos.
BIOTECNOLOGAS PROMISORIAS
Entre las Biotecnologas promisorias para el desarrollo productivo de El Salvador estn: i) Tecnologas Moleculares para diagnstico de enfermedades infecciosas, ii) Bioinformtica, iii) Genmica, iv) Modificacin Gentica de Cultivos, v) Tecnologas recombinantes para hacer productos terapeticos, vi) Bioremediacin, vii) Qumica combinatoria (COMBICHEM) , viii) Bio-nanotecnologa.
(Top 10 Biotechnologies for Improving Health in Developing Countries: www.utoronto.ca/jcb)
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