UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

BIOLOGA MOLECULAR: Herramienta de la Biotecnologa

DOCENTE: Q.F MARLENE HILARIO PORRAS

CONTENIDO:
Objetivos Historia de la Biologa Molecular

La Biologa Molecular: herramienta de la Biotecnologa

Tecnologa del ADN Ingeniera Gentica Marcadores

Reflexin Final

OBJETIVOS:
Estimular el inters de los jvenes hacia la Biologa Molecular y sus aplicaciones en la Biotecnologa. Promover en los educandos el espritu crtico hacia el potencial de la investigacin biotecnolgica para el desarrollo de la humanidad. Presentar elementos de juicio que permitan comprender la importancia de la investigacin en biologa molecular.
. .

AVANCES HISTRICOS DE BIOLOGA MOLECULAR

1941 Genes codifican las protenas 1944 Prueba que el ADN porta la informacin gentica 1953 Determinacin de estructura del ADN y de la Insulina 1956 Enfermedad monognica sustitucin de un aa cadena -hemoglobina 1961 Cdigo Gentico, ARN mensajero, regulacin gnica 1967 Wise y Richardson aislaron ADN ligasa 1970 Smith y colegas aislaron y caracterizaron la Hind III 1972 Janet Mertz y Ron Davis cortaron y pegaron mol de ADN 1973 Stanley Cohen y H. Boyer pusieron ADNr en bacterias 1974 Demostracin directa de deleccin gnica humana 1975 Southern Blotting 1976 Proto-oncogenes 1977 Fred Sanger secuenci el virus de ADN X174 1978 Biblioteca gnica humana 1979 RFPL para diagnstico prenatal, oncogenes celulares

AVANCES HISTRICOS DE BIOLOGA MOLECULAR

1979-81 genes humanos clonados y secuenciados 1982 Tabaco, la primera planta modificada genticamente 1983 Kary Mullis concibe el PCR / Fred Sanger y colegas 1985 1986 1987 1995 1996 1998 1999 2000

2001

publican la secuencia del lambda Un gen de enfermedad aislado por clonacin posicional La secuenciacin del ADN es automatizada Inicia el Proyecto del Genoma Humano Es secuenciado la bacteria Haemophillus influenzae Es secuenciada la levadura Saccharomyces cerevisiae Es secuenciado el nemtodo Caenorhabditis elegans Es secuenciado el cromosoma 22 humano Es secuenciada la mosca de la fruta D. melanogaster / 26 de junio se presenta 90% borrador genoma humano Feb 2001 se completa el genoma humano.

BASES MOLECULARES genoma DE LA VIDA

Clula cromosomas genes

ADN ARN

ADN

PROTENAS
los genes contienen instrucciones para hacer protenas

ADN

protenas

las protenas actan solas o en complejos para realizar las funciones celulares

BIOTECNOLOGA
Es el medio o va de manipulacin de las formas de vida (organismos) para proveer un producto deseable para el uso del hombre.
Areas cubiertas por el trmino Biotecnologa incluyen: i) Biologa Molecular: ADN recombinante, cultivo de clulas animales, cultivo de tejidos vegetales, inmunologa, mejoramiento animal y vegetal, ii) Fermentacin, iii) Sistema de Enzimas y iv) Otras.

Transferencia de genes en animales

BIOTECNOLOGA
Cultivo de Clulas Vegetales Diagnsticos

Frmacos Anti-cncer

Solucin de crimenes Tecnologa del ADN Bancos de ADN, ARN Protenas Mapas de Genomas completos

Biologa Molecular
Ingeniera Gentica
Sntesis de Nuevas Protenas Nuevas Plantas y Animales Nuevos Alimentos Nuevos Antibiticos Clonacin Produccin de Protenas humanas Recursos humanos qumicos raros Terapia Gnica

Marcadores

Sntesis de Sondas de ADN

Localizacin desrdenes genticos

Tecnologa del ADN (Diagnstico Molecular) PCR - REACCIN EN

CADENA DE LA POLIMERASA

El PCR utiliza la capacidad de las

Enzimas polimerasas que catalizan la formacin y reparacin de ADN (y ARN), mediante un mecanismo que permite iniciar y parar su actividad en un punto especfico de una hebra de ADN, para lo cual se emplean polimerasas obtenidas de arqueobacterias como Termophillus aquaticus que resisten temperaturas arriba de los 100C. Kary B. Mullis, de Cetus Corporation que concibi el mecanismo del PCR, en la dcada de los 80,s recibi el Premio Nobel en 1993.

Tecnologa del ADN FINGERPRINTING

El ADN tiene muchas regiones que son muy variables en su estructura (RFLPs) y pueden ser usadas para ADN fingerprintings. El ADN puede ser obtenido de sangre, fluidos corporales y otros tejidos incluyendo hueso, y es relativamente estable, frecuentemente sobre muchos aos. Se requieren cantidades muy pequeas y las muestras pueden ser obtenidas de manera no invasiva.

Tecnologa del ADN (identificacin de paternidad)

MADRE PADRE NIO 1 NIO 2 NIO 3 NIO 4

BIOINFORMTICA Campo convergente de la biologa, computacin e informacin tecnolgica en una misma disciplina.
La meta ltima de este campo es posibilitar el descubrimiento de nuevas ideas biolgicas, as como crear una perspectiva global de la que puedan ser discernidos principios unificadores de la biologa
(www.ncbi.nlm.nih.gov/Education/index.html).

Tecnologa del ADN

Tecnologa del ADN

GENMICA

Es el estudio del genoma y su accin.

El genoma es la suma total del material gentico presente en un organismo particular e incluye el ADN presente en los cromosomas y en los organelos subcelulares (ej., mitocondrias) e incluye el genoma de ARN de algunos virus.
El anuncio el 26 de junio de 2000, del borrador del genoma humano en un 90%, marc un hito histrico para la humanidad.

El genoma de un organismo es el juego completo de ADN. La planificacin del Proyecto Genoma Humano se inici en 1986, previsto para el 2007. En Junio de 2000 se present el 90% del borrador con la secuenciacin de unos 30,000 genes y 3 mil millones de pares de bases (pb). Los genes son secuencias especficas de bases que codifican instrucciones para hacer protenas. Los genes son un 2% del genoma humano.
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en 0.2% 60% De 289 genes humanos implicados en enfermedades, hay 177 cercanamente similares a los genes de Drosophila.

GENOMAS

Tecnologa del ADN

IDENTIDAD GENTICA
70%

20%

95% idntico

Humanos 30,000 genes

Chimpanc 30,000 genes

Ratn 30,000 genes

A. thaliana 25,000 genes

C. elegans 19,000 genes

D. melanogaster 13,000 genes

GENMICA FUTURA
14th International Genome Secuencing and Analysis Conference (oct. 2002), la US Genomics Inc., present un aparato que lee la doble hlice de ADN sin cortarlo. Abre la doble hlice espiral de ADN, la lineariza y la pasa por un escaner para leerla en un lector fijo (como una plicula de carrete pasa por un proyector), las molculas se mueven a 30 M de bases por minuto. En 40 minutos se pueden Leer 3 mil M de bases. Si el sistema se logra pasar a un biochip el tiempo bajar a menos de cinco minutos por la habilidad de capturar un Terabyte (1024 o 1000 gigabites, un gigabite = 1024 o 1000 Megabites) de informacin cada pocos segundos.(Uehling, M. D, Bio-It World Nov. 12 2002).

Tecnologa del ADN

PROTEMICA

La Protemica es la caracterizacin sistemtica a gran escala de las protenas presentes en una clula, tejido u organismo. Es una disciplina en su infancia limitada por la tecnologa disponible para quienes la practican. Este es un diferente paradigma del reduccionismo convencional de la investigacin cientfica que tpicamente se enfoca en un simple gen o una protena; en tanto, que la investigacin del Proteoma (conjunto de todas las protenas que intervienen en los procesos biolgicos de una especie) aborda problemas tales como el nivel de protenas o actividades que cambian entre dos condiciones experimentales
(Spelcher, 2002. The Scientist 16(8): 12, Apr. 15).

Tecnologa del ADN

DISCIPLINAS MICAS
Est ocurriendo la transicin de dcadas de biologa reduccionista, enfocadas a un gen o a una protena, por utilizacin de las nuevas disciplinas omicas que incluyen: Transcriptmica (espectro de molculas de ARN en cada clula tipo), Metabolmica (todos los qumicos en la clula), Fisimica (funcin de rganos, tejidos y ultimadamente el organismo completo). Crtico para el xito de esta revolucin es la

bioinformtica y nuevas estrategias de computacin, para modelar las propiedades de

clulas, rganos y estados de enfermedad, produciendo rganos y pacientes virtuales
(Goldman, M., Bio-It World Nov.24 2002).

INGENIERA GENTICA O ADNr

La Ingeniera Gentica o tecnologa del ADNr se inici en la dcada de los 70s. Se refiere a un grupo de tecnologas usadas para cambiar la composicin gentica de las clulas y mover genes a travs de las fronteras de las especies para producir nuevos organismos. Se pueden aislar genes, modificarlos, introducirlos a nuevos hospederos, y clonarlos para obtener una ventaja novedosa sobre el organismo natural.

ESTRUCTURA DE UN GEN
Los promotores pueden ser genricos o tejido especfico

Promotores Sitio de inicio de la Transcripcin Exones Intrones

Realzadores Sitio de terminacin de la Transcripcin

< 100 Kb

La funcin del gen depende de los FACTORES de TRANSCRIPCIN (FT) que activan a las ARN pol. Los FT son: los Factores de Transcripcin General (se unen a secuencias promotoras genricas) y los Activadores de Transcripcin (se unen a secuencias promotoras especficas). Los FT pueden encenderse o apagarse en respuesta a estmulos del entorno del individuo. Entre los promotores de los genes que desarrollan la capacidad cerebral o talento de los individuos estn la alimentacin, la salud, el estmulo temprano con experiencias motivadoras (el juego), el amor.

Ingeniera Gentica SISTEMAS DE TRANSFERENCIA GENTICA

1. Agrobacterium. Uso de la bacteria Como "Ingeniero Gentico". La bacteria conteniendo el inserto, infecta las clulas de la planta produciendo la recombinacin gentica. 2. Acelerador de Partculas (Gene Gun). Un can artificial bombardea micropartculas con el inserto, sobre la clula. 3. Electroporacin. Uso de carga elctrica para que el ADN atraviese la membrana nuclear. 4. Polietilenglicol. Exposicin de las membranas al PEG, facilita el movimiento de las molculas de ADN. 5. Silicon Wiskers. Inyeccin con fibras microscpicas, que atraviesan las membranas con los insertos.

Ingeniera Gentica NUEVAS PROTENAS

Enzimas producidas por Biotecnologa mediante el ADN recombinante se usan como aditivos en dietas de aves, para digerir carbohidratos complejos como las

beta-glucanasas, alfa-amilasas, maltasas, oligo 1-6 glucosidasas, xilanasas, sacarasas; lipasas; proteasas y fitasas (para la utilizacin del fsforo).
En Mxico, tienen un gran impacto en la produccin avcola proporcionando 3/5 de carne de aves para el consumo de protena animal. Se considera que el mercado mundial de enzimas como aditivos en los alimentos crecer del valor actual de US $ 60 millones (Avila G., E. Huatulco 2001). al doble para el 2005.

Ingeniera Gentica NUEVAS PLANTAS

ARROZ con altos niveles de tolerancia a

diferentes condiciones ambientales de estrs. Se insertaron dos genes fusionados de trehalosa de E. Coli y un promotor tejido especfico dependiente del estrs. Los genes de trehalosa permiten la produccin de arroz an si est estresado por frio, sequa o altos niveles de salinidad e incrementa la produccin en 20%. La composicin qumica de los granos no cambia. El azcar trehalosa ayuda a estabilizar molculas biolgicas: lpidos, enzimas y otras protenas, en organismos en condiciones de estrs (PNAS Online, 27 nov. 2002).

Ingeniera Gentica NUEVOS ANIMALES

1987 secrecin de Beta-lactoglobulina en leche de ratn.

Produccin de protena C humana en leche de cerdos, para desrdenes como hemofilia. Hormonas de crecimiento humano en tejido seminal de cerdo.
Antitrombina humana III, anticoagulante sanguneo secretada en leche de cabras transgnicas. Cabras transgnicas para producir BioSteel fibra hecha por el hombre con propiedades de tela de araa.

Ingeniera Gentica NUEVOS ALIMENTOS ARROZ DORADO con beta caroteno de genes de narciso y de Erwinia uredovora, pigmentos que se transforman en pro-vitamina A al ser ingeridos. Hay 70 patentes implicadas en la consecucin del arroz dorado; acuerdo con la industria reducen a 12 las patentes esenciales y se limita su cultivo gratuito a las explotaciones agrcolas que no superen los 10.000 dlares de beneficios anuales (Gebelli, 2001). ARROZ fortificado con un gen de la ferritina del frijol de soya. ARROZ con aa esenciales.

Ingeniera Gentica NUEVOS ALIMENTOS Salmn transgnico por

hormona de crecimiento. Producido por AF Protein Inc. Cuenta con el promotor de la protena de anticongelamiento de otra especie de pez. Crece de 4 a 6 veces ms rpido que un salmn no transgnico. Tiene un 20% en mejoramiento de la eficiencia de conversin del alimento. (ISB, 2001, oct; Netlink, 2000). Cerdo transgnico para el precursor de la hormona de crecimiento proteasa resistente (GHRH). Por tcnicas de mutagnesis sitio dirigida y terapia electrognica, se introdujo en msculo de cerdo. Los efectos de una inyeccin de 10 mg de dosis del plsmido, en cerdos de tres semanas de edad, se mantuvo sobre 60 das con un 42% mayor que los controles a los 62 das (42 kg contra 29 kg). (ISB, 2000 mar).

Ingeniera Gentica NUEVOS ANTIBITICOS

PAPA con la vacuna que previene la insulina dependencia de la diabetes mellitus 100 veces ms poderosa que la actual vacuna. PAPA con la sub-unidad B antignica de la enterotoxina del Vibrio cholerae causante del clera). FRIJOL de SOYA con anticuerpos que protegen contra el virus 2 de Herpes simplex (HSV). TABACO con anticuerpos que previenen la caries dental producida por

Streptococcus mutans.

Ingeniera Gentica

CLONACION

Trmino genrico para la replicacin en un laboratorio de genes, clulas u organismos de una entidad original, con copias genticas exactas del gen, clula u organismo original. Esta tcnica ha producido avances sensacionales en medicinas y vacunas. Tambin hay investigacin en clonacin de clulas humanas, rganos y otros tejidos. Esto puede producir el reemplazo de piel, cartilagos y hueso para victimas de quemaduras y accidentes, o de rganos.

Ingeniera Gentica

TERAPIA DE CLULAS MADRE

DA 4

Cavidad

clulas de cubierta interna

Masa de clulas internas

Masa de clulas internas (clulas Madre Embrionarias)

Clulas MADRE para transplantes de Organos

M A DE CEL AS IN R AS AS UL TE N

Clulas NE VI S R O AS

Clulas Forma doras de S GE AN R

CL A MD E E UL S A R

BL S O S O A T CI T
Modificado de: Scientific American, 2001 Clulas P C E C AN R ATI AS Clulas C DI C AR A AS

Ingeniera Gentica

TERAPIA GNICA
Rafael Valdes del Hospital de Nios de Mxico Implant clulas de cerdo en 12 adolescentes en procura de curar su diabetes. En su mtodo, us clulas especializadas para proteger el transplante de los sistemas inmunolgicos de los pacientes hospederos, que nunca haba sido ensayado en humanos. Los implantes en los pacientes constan de clulas pancreticas de cerdo, las cuales producen insulina (hay 150 millones de diabticos en el mundo) . Para prevenir el rechazo del transplante implant clulas de Sertoli (de testculo de cerdo) que han mostrado que protegen a los tejidos transplantados del sistema inmune recipiente en algunos modelos animales. Uno de los pacientes ha dejado de inyectarse insulina y cinco otros estn tomando menos insulina que antes. Los resultados han llegado sin usar medicamentos Inmunosupresores, los cuales tienen que ser dados por el resto de sus vidas a recipientes de transplantes (Nature/Vol. 419/5 sept. 2002).

Marcadores SONDAS DE ADN

El microarreglo de ADN pone secuencias de genes en una lmina. Los ARNm de una clula particular con tags fluorescentes, se hibridizan, a las secuencias cuando son complementarias. Un escner mide la fluorescencia de cada muestra sobre la lmina, para determinar la presencia o actividad de los genes.
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Marcadores
GEN

LOCALIZACIN DESORDENES GENTICOS

DROGA CONSECUENCIAS CLNICAS

NAT-2

Isoniazida, hidralazina, procainamida, sulfonamidas

Neuropata, lupus eritomatoso

CYP2D6

bloqueadores antidepresivos, codena, debrisoquina, antisicticos, muchos otros Tolbutamida, feniltoina, anti inflamatorios no esteroideos
Halotano y otros anestsicos Primaquina, sulfonamidas, acetanilida, otros Captopril, enalapril Quinadina Claritromicina

Arritmias, disquinecia con antisicticos, efectos narcticos, cambios en eficacia, muchos otros Efectos anticoagulantes modificados de warfarin
Hipertermia maligna Anemia hemoltica Modif. respuesta a tratamiento de falla cardaca, hipertensin, enfermedad renal Arritmia cardaca (sndrome QT largo) Arritmia inducida por droga

CYP2C9
RYR-1 G6PD ACE HERG HKCNE2

Marcadores FUTURO NANOTECNOLGICO

Shumin Nie y sus colegas desarrollaron un cristal superconductor a escala nanomtrica llamado punto cuntico (diez nanmetros es un dimetro 1000 veces menor que el grosor de un cabello humano). Las nanopartculas que usa pueden brillar en un espectro de seis colores visibles y cuatro infrarrojos. Variando su tamao ligeramente, se puede hacer que brillen en uno de los 10 colores disponibles. En un futuro prximo, podrn ser enlazadas a frmacos mdicos o agentes teraputicos para identificar y tratar clulas cancerosas. Una vez detectadas estas ltimas, podran actuar como "bombas inteligentes", liberando una cantidad controlada de medicamento que sea apropiado para cada tipo particular de clula (Bowie, L. Georgia Institute Technology, oct. 23 2002).

REFLEXIONES
El que investiga genera nuevos CONOCIMIENTOS, que pone a disposicin de otros como DATOS, que al ordenarse son INFORMACIN, que puede llegar a ser CONOCIMIENTO til, apropiado o adaptado, por la infraestructura de investigacin de C&T que posea un pas.

REFLEXIONES
La incidencia positiva que las actividades de I+D tienen sobre el desarrollo de los pases ha conducido a los gobiernos de los diferentes estados a destinar una parte de sus recursos financieros a potenciar ambas actividades. De esta manera ha sido posible diversificar las lneas de investigacin con la finalidad de abarcar cada vez ms campos y, al mismo tiempo, asegurar la formacin de personal cualificado. CHINA, actualmente a la vanguardia en el desarrollo cientfico y tecnolgico mundial, fundament en 1980 su productividad y competitividad, mediante Polticas de Ciencia y Tecnologa, que form miles de Ph.D. en todas las disciplinas de la C&T, en las ms prestigiosas Universidades del mundo. CHILE, pas al que imitamos constantemente, ejecuta la estrategia de las tres (C) COPIAR, COMPRAR, CREAR, para lo cual cuenta con recurso humano calificado.

REFLEXIONES

Es de urgencia para el pas apostarle a una Poltica de Nacin de Ciencia y de Tecnologa, que identifique los nichos de conocimiento a ocupar, y promueva la adquisicin de infraestructura necesaria y la formacin de recursos humanos con capacidad de investigar, desarrollar y aprovechar tecnologas que ayuden a mejorar la calidad de vida de los salvadoreos.

MUCHAS GRACIAS llamado punto cuntico POR SU ATENCION