CRITERIOS A SEGUIR PARA EL ANLISIS DE FERTILIDAD CON PRUEBAS DE ESPERMATOGRAMA

Dra. Sonia Meza C. Bioqumica Farmacutica HB-11 Galpagos

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En los ltimos aos se han logrado avances notables en el conocimiento de los mecanismos de la reproduccin humana, as como en los mtodos de investigacin y diagnstico de los trastornos de la fertilidad. A pesar de esto, el anlisis del semen sigue siendo un examen imprescindible en el estudio del hombre que acude a la consulta por infertilidad.
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Un anlisis seminal completo nos informa sobre las propiedades del semen en su conjunto, tanto la produccin de espermatozoides como de la funcin de las glndulas sexuales accesorias
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Liquido seminal o esperma

Espermatozoides Suspendidos en secreciones: testculo y el epiddimo. Se junta con secreciones: Prstata, vesculas seminal y las glndulas bulbo uretrales Dando lugar a un liquido viscoso denominado eyaculado
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Composicin del semen - -10% espermatozoides, 90% lquido seminal - La densidad de espermatozoides vara de 50 a 150 millones por ml - La vescula seminal aporta entre el 40% y el 60% del semen, crea principalmente - Fructuosa - Fsforo - Prostaglandinas - Potasio - Aminocidos - Hormonas
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La prstata aporta de 15% a 30% del plasma seminal, crea un lquido rico en
cido ctrico Carnitina Fosfatasa alcalina Potasio Calcio Sodio Zinc

Enzimas para la separacin de las protenas y fibrolisina (enzima reduce la sangre y las fibras del tejido)
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 El ltimo es un fluido que secretan las glndulas uretrales (glndulas de Cowper y Littre ubicadas bajo la prstata y aportan la secrecin mucosa del semen) y bulbouretrales, que representan el 3% al 6% del semen, segrega una protena espesa, clara y lubricante conocida como moco
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Los parmetros analizados en el semen reflejan :

La funcin exocrina de las glndulas sexuales masculinas y nos orientan sobre patologas del sistema genital. Al sufrir una transformacin desde el momento de la eyacualcin,para su estudio correcto: Debemos tratar la muestra con unas condiciones adecuadas y estandarizadas para evitar sesgos artificiales.
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Algunas causas de infertilidad masculina pueden determinarse por el anlisis de la eyaculacin, la que contiene el esperma. El anlisis consiste en el conteo del nmero de esperma y la medida de su movilidad bajo un microscopio:
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Valores normales de los indicadores del espermograma

Normalidad

Volumen > 2.0- 8.0ml Licuefaccin Completa pH > 7.2-8.0 Concentracin esp > 20 millones / ml N eyaculados > 40millones esp. Movilidad lineal progresiva a+ b > 50% tipo Morfologa normal > 50% Vitalidad > 75% de formas no teidas Criterio estricto >30% 10 Aglutinaciones < 10%

Nomenclatura descriptiva de los hallazgos del espermograma

>20000.000 /ml Oligozoospermia: <20000.000/ml Astenozoospermia: - 50% de esp. Con progresin lineal (a+b) o - 25% con progresin rpida (a) Teratozoospermia: - 50% con morfologa normal Azoospermia: Ausencia de espermatozoides en el eyaculado Aspermia: Ausencia de eyaculado externo Leucocistospermia: Presencia de >1000.000 , de leucocitos/ml
Normozoospermia:
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Estudio bsico del semen segn la OMS

1.Examen macroscpico: Licuefaccin, aspecto, volumen, viscosidad, pH.Concentracin de esp.y otras clulas. Motilidad Vitalidad. Morfologa espermtica Presencia de aglutinaciones. Deteccin de anticuerpos antiespermatozoide unidos a la superficie espermtica
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Opsional ndice de teratosrpermia Test hipoosmtico Cultivos seminales Anlisis bioqumico de Lquido Seminal Anlisis automtico de la movilidad espermtica
Avanzados Test de funcin espermtica: Especies reactivas de oxgeno Test de la zona pelcida Evaluacin de la reaccin acrosmica Anlisis automtico de la morfologa espermtica Tcnicas de recuperacin de espermatozoides 13 mviles

INTERPRETACIN DEL ANALISIS SEMINAL

no de 2 anlisis seminales Tambin las caracterstica fsicas como su apariencia , volumen eyaculado, viscosidad o consistencia, pH, as como conteo de clulas, en especial de leucocitos
Realizar

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Obtencin de la muestra
Por masturbacin el mismo da del examen Frasco de vidrio o de plstico atemperado 2040 C,de boca amplia Slo una eyaculacin Se recomienda: abstinencia de 3 -7 das. Lo ideal: recoger la muestra en un cuarto cerca del laboratorio. Evitar choque trmico (20-40 C Entregarlo lo antes posible (1h).
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1.Examen macroscpico

Licuefaccin: Al recibirla incubar a 37C durante 2060(1h) Y agitar (no vortex)Determinamos si esta licuado.
Si sigue sin estar licuada Observar: grumos, hebras, cogulos. Liquido anormal. Sin importancia clnica, interfiere en el anlisis del semen. Utilizar; digestin enzimtico, tampn fosfato 1:1, medio d e cultivo. Referir los resultados a volumen inicial. Y si es para TRA, medio estril, y no usar digestin enzimticoa 37C 16

1. Examen macroscpico

Aspecto: Observaremos despus de la licuefaccin. Color normal nacarado o gris opalescente. Color rojizo o marrn (hemates). Color amarillento (ictericia, alto vitamina B2) o alto nivel de flavoprotenas oxidadas de vesculas germinales (elevada abstinencia
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Volumen:

Para medirlo:Tubo graduado de 15ml, cnico, tipo Falcon,con tapa hermtica testado para txicos celulares. Volumen referencia: > 2ml V < 2ml: hipospermia u oligospermia. Cuando existe orgasmo y no eyaculacin tras la masturbacin nos encontramos ante una aspermia (ausencia de eyaculado) Aspermia sospecharemos de una eyaculacin retrgrada
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Protocolo para el estudio de los espermatozoides pacientes con eyaculacion retrgrada La OMS no tiene recomendaciones. Noche anterior a la recogida de la muestra: ingerir una cucharada a sopera de bicarbonato sdico Alcalinizamos la orina y evitamos al mximo El da de la recogida: Seguidamente se toma 4 gramos o 2 cucharadas soperas debicarbonato sdico, y agua litro, 750 ml diabticos. Se espera, recoge orina: osmolaridad de 350400 milios mol Kg y pH 7.2-8 8 Entonces se recoge orina postorgasmo en frasco con medio de cultivo. Hacemos 19

Viscosidad
Diferenciarlo licuefaccin Cogeremos una pipeta Pasteur con semen y dejaremos caer su contenido Valor de referencia: gotas o se forme un filamento < 2cm Si fuera mayor, anotaremos viscosidad anormal. Y lo trataremos: aadiendo medio tampn
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pH
Utilizando tiras reactivas de rango 6.4 - 8.0 1 gota de semen en la tira y 30 seg. Comparamos color con la escala de colores

Valor de referencia: pH > 7.2

pH: c infeccin

pH <7.2+ azoospermia sugiere obstruccin de conductos eyaculadores o agenesia bilateral de deferentes

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2.- Motilidad espermtica

Segn la OMS

Muy buena (tipo A) Buena (tipo B) In Situ(Tipo C) Muy mala los que no se mueven (Tipo D) Porcentaje de espermatozoides cuya forma es normal> 14 Nmero total de espermatozoides mviles tiles
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10 microlitros Tipo a: 3% Porta atemperado 37C Tipo b: 32% Se5% estabilizar unos 60 seg. Tipo c: deja Observamos a 100 aumentos muestra homognea.Tipo d: 60%

A continuacin pasamos a 400 X con contraste de fase. Contamos, 1los mviles tipo a y b, y a continuacin los c y d. Se contaran 100 esp. en un porta, con contador de laboratorio.
Repetimos con otro porta Tipo a: 20% Tipo b: 40% Tipo
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3. Vitalidad espermtica
Nos permite evaluar los espermatozoides vivos. . Segn la OMS se estudiara cuando la < 50 movilidad Se hace de manera indirecta, estudiando el estado de la mmb.. Los vivos tiene la mmb plasmtica intacta y los muerto daada Tincin supravitales eosina-negrosina y los basados en la capacidad osmorreguladora de la membrana: Solucin hipoosmtica, 37C, 5min. Valor de referencia > 60% hinchados
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4. Aglutinaciones y agregaciones Aglutinacin visualizacin de espermatozoides mviles unidos por las cabezas, colas,cabeza cola. Agregacin unin de esp. a espermatozoides inmviles, generalmente muertos, a otras cl, a restos, fibras mucosas. Se valora a la vez que la movilidad Se anota en el seminogramas con una escala semicuantitativa: No aglutinacin (-), pequeas aglutinaciones pueden ser normales (<10%) Totalidad (+++) La presencia de aglutinaciones: sugiere presencia de anticuerpos, causa inmunolgica de infertilidad, infeccin, aparece con + frecuencia en eyaculados hiperconcentrados 25

5.- Morfologa espermtica

Tcnica de tincin recomienda: Papanicolau, Shorr, Diff, Quick Cabeza: azul Pieza intermedia: rojiza Cola: azul o rojiza Deben de evaluarse 100 espermatozoides (2 extensiones.) Observar con objetivo de inmersin. Slo se cuentan los espermatozoides completos. y valorar la diferencia de los porcentajes y este debe de estar dentro del 95% de i.c. de error debido al azar.
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Criterios segn la OMS

Forma Ovalada Acrosoma Bien definido, ocupa 40-70% de la cabeza Longitud 4- 5micras Pieza intermedia Anchura 2.5- 3.5 micras Longitud 1.5 *L cabeza Anchura < 1 micra Forma Delgada unida axialmente a la Flagel cabeza o Recto, uniforme, + delgada P Restos en la pieza citoplasmticos intermedia. Desenrollado. 45 Valores limitantes intermedia u < 1/ 2 cabeza

Cabeza

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ANOMALIAS MORFOLOGICAS

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6. Concentracin espermtica
Valor de referencia: > 20 millones /ml. Para medir la concentracin espermtica la OMS recomienda:

Contaje
400x <15 15- 40 40- 200

Dilucin

Semen,
microL

Diluyente
microL 400 450 950

1:5 1: 10 1: 20

100 50 50

>200
2450

1: 50

50

Diluyente es una solucin fijadora: solucin salina + formalina

Si hay menos de 2 *campo,centrifugo 3000g,15 minutos.

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6. Concentracin espermtica
Hemocitmetro: cmara de NEUBAUER Improved. Makler Microcell..

M de contraste de fases (200 a 400x)

Solo espermatozoides completos. Se debe de realizar por duplicado < 10 esp * cuadro grande:contamos 25 cuadros 10-40 esp:contamos 10 cuadros > 40 esp:5 cuadros

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7. Cel redondas,
Cl epiteliales, las de la espermatognesis y leucocitos. Valor normal < 5 millones/ml ml La concentracin de estas clulas se puede medir directamente a partir de la siguiente frmula
C =(N x S)/100 N = 10 clulas inmaduras 100 espermatozoide contados S = 20 millones de espermatozoides/ ml C =(10 x 20)/100 =2 millones de clulas/ml
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leucos son indicativos de infeccin (cultivo),y mala calidad espermtica. No debera exceder 1 milln/ml Las tcnicas para la deteccin esta basada en la presencia:de la peroxidasa intracelular de antgenos especficos de leucocitos clulas inmaduras desordenes de la espermatognesis: Hipo espermatognesis varicocele, alteracin de las clulas de Sertoli Para diferenciarlas de los leucos tincin Bryan Leishman diferente morfologa, y ausencia de peroxidasa.

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Determinaciones bioqumicas
1.- Determinacin de la Capacidad fecundante
Se informa tiempo de comienzo y tiempo de la decoloracin total del azul de metileno

Fertilidad es ptima la decoloracin se produce en 15 a 30 minutos, moderada a los 30 minutos 33

2.- Determinacin de fructosa (solucin de resorcina)

La fructosa sustancia responsable de la movilidad de los espermatozoides, interviene en la gnesis de la testosterona. Es posible reactivar la motilidad disminuida con el agregado de la fructosa VN : 200-400 miligramos/100 ml La cantidad de fructosa en el plama seminal expresa el grado de actividad hormonal

3.- Determinacin de cido ctrico

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4.- Determinacin de cido ascrbico No se conoce en forma cabal el significado . Para algunos estara relacionado con el mecanismo de licuacin; para otros, tendra alguna relacin con la concentracin del calcio.
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ndices de fecundidad probable

Influencias endocrinolgicas.
Consideran la espermiognesis y su relacin con la funcin tiroidea. La FSH, acta sobre el testculo, a nivel del epitelio germinativo testicular La LCSH, hormona estimulante de las clulas intersticiales o clulas de Leydig que segregan testosterona, hormona reguladora de la maduracin espermtica
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ndices de Hinglais
CMNQ 109

C . Nmero de espermatozoides M : % de elementos mviles N: % de elementos normales Q: Intensidad de la motilidad media de los espermatozoides Fecunda posible si el valor es igual o superior a 2. Fecundacin probable entre 2y 15 y estadsticamente fecunda cuando es superior a 20

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ndice de Farris
N1.M

N1: Nmero total de espermatozoides en el volumen total eyaculado M: % de espermatozoides mviles Subfrtiles: cifras entre 0 y 40 millones Fertilidad probable: entre 40 y 60 Fertilidad segura: igual o superior a 120 millones
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Infertilidad
Es la imposibilidad de concebir un nio naturalmente o de llevar un embarazo a trmino despus de un ao de vida sexual activa. El Consejo Internacional de Difusin sobre Infertilidad considera Si no han concebido despus de mas de 12 meses de mantener relaciones sexuales sin proteccin o despus de 6 meses si la mujer tiene ms de 35 aos de edad No puede llevarse el embarazo a trmino
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Causas: Primaria vs secundaria La infertilidad secundaria es la dificultad de concebir despus de haber concebido y tenido un embarazo normal. Por definicin, la infertilidad secundaria no ocurre si ha habido un cambio de pareja Algunas mujeres son infrtiles porque sus ovarios no liberan vulos. La FSH puede ser inyectada al torrente sanguneo
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Infertilidad femenina Algunos factores que se relacionan con la infertilidad femenina son: Factores generales Diabetes mellitus, problemas tiroideos, enfermedades suprarrenales Significant liver, enfermedades renales Factores psicolgicos Factores hipotalmico-pituitarios: Sndrome de Kallman Disfuncin hipotalmica Hiperprolactinemia Hipopituitarismo 41

Factores ovricos Sndrome de ovario poliqustico Anovulacin Diminished ovarian reserve Luteal dysfunction Menopausia prematura Gonadal dysgenesis (sndrome de Turner) Neoplasma ovrico Tubal/peritoneal factors Endometriosis Pelvic adhesions Enfermedad plvica inflamatoria (PID, usually due to chlamydia)
Oclusin tubal Factores uterinos Malformaciones uterinas Uterine fibroids (leiomyoma)

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Sndrome de Asherman Cervical factors Cervical stenosis Antisperm antibodies. Anticuerpos de antiesperma. Insufficient cervical mucus (for the travel and survival of sperm) Moco insuficiente cervical Factores vaginales Vaginismus Obstruccin vaginal Factores genticos Various intersexed conditions, such as androgen insensitivity syndrome Anorexia

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Infertilidad masculina Algunos factores relacionados con la infertilidad masculina son: Causas pre-testiculares Problemas endocrinos, como diabetes mellitus o problemas de tiroides Desrdenes hipotalmicos, como el sndrome de Kallmann Hiperprolactinemia Hipopituitarismo Hipogonadismo debido a causas varias Factores psicolgicos Drogas, alcohol Factores testiculares Defectos genticos en el cromosoma Y Microdelecciones del cromosoma Y. Conjunto anormal de cromosomas
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Criptorquidia
Varicocele Trauma Hidrocele Sndrome de disgnesis testicular Causas post-testiculares Obstruccin de conductos deferentes Infeccin, (ej. prostatitis) Eyaculacin retrgrada Hipospadias Impotencia Defecto acrosomal / Defecto de penetracin al vulo 45 Consumo de tabaco

De acuerdo a un estudio conducido por la Sociedad Americana de Medicina Reproductiva, fumar es uno de los factores prominentes que contribuyen al bajo conteo espermtico en hombres.
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Produccin de poco esperma, oligospermia, o de ninguna esperma, azoospermia.

Una muestra de la esperma que es normal en gran nmero pero demuestra movilidad baja, o astenozoospermia.
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Infertilidad combinada
Tanto el hombre como la mujer pueden se infrtiles o subfrtiles. En otros casos, se sospecha que la causa es inmunolgica o gentica Infertilidad inexpicable En alrededor del 15% de los casos, las investigaciones de infertilidad no muestran anomalas. Un posible problema puede ser que el vulo no es liberado en el momento ptimo para su fertilizacin, que no entre en la trompa de falopio, que el esperma no pueda alcanzar el huevo, que la fertilizacin falle, que el transporte del zigoto sea interrumpido, o que la implantacin falle. Las mujeres de edad avanzada tienen huevos de la capacidad reducida para la fertilizacin normal y exitosa.
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Infertilidad inducida prevencin

En el caso de enfermos de patologas graves (como el cncer) que son sometidos a tratamientos agresivos para conseguir la remisin de la enfermedad (radioterapia, quimioterapia), un efecto secundario frecuente y no deseado es la prdida de la capacidad reproductora, debido a la destruccin de los tejidos productores de gametos, espermatozoides u vulos
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Preservacin de fertilidad para las mujeres Criopreservacin de embriones

Criopreservacin de tejido ovrico

Supresin ovrica

Transposicin de ovarios
Ciruga ginecolgica conservadora Una ltima tcnica que se ha desarrollado es la vitrificacin de ovocitos
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Tratamiento El tratamiento de la infertilidad por lo general comienza con la medicacin. Tambin se puede recurrir a tcnicas de reproduccin asistida, como la inseminacin artificial o la fecundacin in vitro (FIV). Otras tcnicas son por ejemplo tuboplasty, la incubacin asistida y DGP.
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GRACIAS

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